一、大鼠胰腺促性腺激素释放激素受体mRNA的原位杂交（论文文献综述）
汪长江[1]（2020）在《CircAkap17b作为miR-7家族的分子海绵调控大鼠腺垂体FSH分泌机制研究》文中指出腺垂体作为哺乳动物最重要的内分泌器官,在动物生长发育,代谢,繁殖,泌乳与哺乳、应激反应中起着关键调控作用。腺垂体合成分泌的FSH和LH不仅可以诱导和维持正常的卵泡发生和精子产生,调节生殖过程,而且FSH可以直接调节骨量,防止骨质流失,还可以减少体内脂肪的积累并保持能量稳态。因此,进一步明确FSH合成与分泌的分子调节机制至关重要。环状RNA（circRNA）是最近发现的一种特殊的新型内源性非编码RNA,越来越多的研究表明circRNA在各种生理活动和癌症中发挥关键作用。然而,circRNA是否参与FSH调控,影响哺乳动物的生殖的研究仍然是未知的。为了探索circRNA对腺垂体FSH分泌的影响,我们在前期通过不同发育时期大鼠腺垂体circRNA的差异表达谱分析,筛选到一个表达丰富且差异表达的circRNA,根据它的来源命名为circAkap17b,进行进一步的研究。本研究通过双荧光素酶报告系统和转染实验,分析了miR-7家族对FSHβ转录后调控的作用;进而应用生物信息学解析差异表达的circAkap17b与miR-7家族的相互作用关系;构建过表达circAkap17b质粒和设计siRNA分析circAkap17b对腺垂体FSH分泌的潜在影响;双荧光素酶报告系统和RIP实验等验证circAkap17b与miR-7家族的相互作用。结果表明:1.miR-7家族可以靶向FSHβ,抑制大鼠腺垂体FSH的分泌。同大鼠的其他组织相比,miR-7在大鼠垂体中有很高的表达水平,存在显着差异;同时miR-7在成熟大鼠垂体中低表达。双荧光素酶报告系统和miR-7的转染实验证明miR-7抑制大鼠腺垂体FSH的分泌。2.CircAkap17b可以作为miR-7的分子海绵调控大鼠腺垂体FSH的分泌。通过基因组比对表明circAkap17b来源于大鼠的X号染色体上Akap17b基因的反义链,同时使用荧光原位杂交技术（FISH）,电泳和RT-qPCR来鉴定circAkap17b。之后通过沉默和过表达circAkap17b后,FSH基因和激素受到明显的影响,这表明circAkap17b对FSH分泌具有潜在调控能力。RIP实验和双荧光素酶报告系统证明circAkap17b与miR-7具有靶向关系,拯救实验也表明circAkap17b可以通过miR-7去调控大鼠腺垂体FSH的分泌。综上所述,本研究分析了差异表达的circAkap17b通过circAkap17b—miR-7—FSH信号途径调控大鼠腺垂体FSH的分泌,解析了大鼠垂体中的circRNA参与调控生殖分泌的方式,为进一步解析调控垂体激素分泌的生物学机制提供理论支持。
王曙明[2]（2014）在《山羊下颌腺和胰腺中GnRH及GnRHR在生后发育时期变化规律的研究》文中提出《中国羊品种志》中收录的济宁青山羊是一种原产自我国，并且在国、内外有较高知名度的优秀裘用地方品种。它有着四季发情、性成熟早、早期发育快、高产、羔皮优良、肉质鲜美等多特点。促性腺激素释放激素（GnRH，gonadotropin releasing hormone）是下丘脑-垂体-性腺轴的原始动力，在动物生殖过程中起着至关重要的作用。目前促性腺激素释放激素和促性腺激素释放激素受体（GnRHR，gonadotropin releasing hormonereceptor）的研究多集中于下丘脑、垂体、子宫中。对家畜生后发育时期，性腺轴中GnRH和GnRHR的研究，仅有本实验室的刘宵同学做过相关报道，在性腺轴外的组织器官中的研究迄今未见报道。为了解青山羊生后发育时期颌下腺和胰腺内GnRH和GnRHR的分布和发育变化。本试验运用免疫组化（SABC）检测了济宁青山羊自出生当天（0日龄）180日龄下颌腺和胰腺中GnRH和GnRHR免疫阳性细胞的动态分布；采用Western Blot法鉴定了GnRH和GnRHR蛋白片段的分子量；用ELISA的方法检测了GnRH和GnRHR蛋白相对含量的变化趋势；Western Blotting结果为GnRH蛋白片段位于20KDa左右，GnRHR蛋白片段位于40KDa左右。在下颌腺内，GnRH和GnRHR免疫阳性产物均定位在胞质中，为黄色或者棕黄色，胞核阴性，阴性对照无阳性着色。0日龄，GnRH免疫阳性产物仅分布在导管（纹状管）上皮细胞；30日龄后，在浆液性腺细胞与导管（纹状管）管壁上皮细胞中有广泛分布。0日龄，GnRHR免疫阳性产物在导管管壁上皮细胞零星分布；30日龄后，在导管（纹状管）管壁上皮细胞广泛分布。自0日龄-90日龄，GnRH和GnRHR免疫阳性细胞数量增加均极显着（P＜0.01），90日龄后维持相对稳定（P＞0.05）。GnRH和GnRHR免疫阳性细胞在胰腺内（胰岛）、外分泌部中均有广泛分布；免疫阳性产物呈现黄或棕黄色，位于胞质中，胞核呈淡蓝色（阴性）。在内分泌部，出生当天便可见胰岛中有阳性细胞着色；在外分泌部，免疫阳性细胞均广泛分布于浆液性腺泡，免疫阳性物质多位于细胞靠腺泡腔处，细胞多呈锥形，常成群分布，也可单个或几个存在。在内、外分泌部，GnRH和GnRHR免疫阳性细胞均在60日龄出现峰值，60日龄后变化不大（P>0.05）。ELISA的结果也进一步印证了GnRH和GnRHR免疫阳性细胞的动态变化，综上所述，GnRH可能通过GnRHR的介导促进了下颌腺及胰腺的生后发育及成熟过程。
黄丽波[3]（2013）在《GnRH、GTH、GH及其受体在山羊垂体—卵巢轴中的发育性变化》文中认为促性腺激素（GTH）、促性腺激素释放激素（GnRH）、生长激素（GH）及Ghrelin在哺乳动物的生殖调控中起着关键作用，其生理调控作用主要是通过与相应的受体FSHR、LHR、GnRHR、GHR结合来介导完成。因此，研究这些激素和受体在生后发育过程中垂体、卵巢内的表达与分布情况，是理解其在生殖发育调控中如何影响垂体-卵巢轴作用机理的基础。本试验以D0-D180日龄的雌性济宁青山羊为研究对象，采用免疫组织化学、RT-PCR和Western-blot方法研究从出生至性成熟（D0-D180）过程中垂体-卵巢轴中这些激素和受体表达定位以及mRNA表达规律，结果表明：D0-D180日龄血清中雌激素（E2）含量差异显着，孕激素变化趋势与E2相近，含量均以D0为多，D30显着下降，在D90和D180分别出现两个峰值，P是D120骤然上升。FSH在D0、D90有所升高；LH变化趋势基本同E2，在D90出现峰值。P的峰值出现是在LH之后，符合LH在促进排卵后，刺激P分泌的生理规律。而E2、FSH、LH含量在D90时处于高峰，可能是济宁青山羊发情早的原因之一。垂体内FSH、LH、Ghrelin、GnRH、GnRHR、GH、GHR、AR阳性细胞及其mRNA在D0-D180日龄山羊腺垂体内均有分布和表达，阳性细胞呈区域状分布，随着日龄增长阳性区域也增大。垂体细胞内GH、Ghrelin与LH分布特点和mRNA变化趋势相同，以D60显着高于其他月龄（p<0.05），其次是D30、D90，提示在D30-90阶段垂体细胞通过大量合成分泌这些激素，调控垂体自身及卵巢等器官的功能活动，这可能是济宁青山羊性成熟早的物质基础。垂体和卵巢GnRHR、GHR、AR mRNA表达量在D60-D180间变化不大，提示受体含量在生后发育至性成熟阶段是相对恒定的，真正影响功能发挥的是取决于其相应激素含量和分布位置。在垂体和卵巢内有Ghrelin、GnRH免疫阳性细胞和mRNA表达，可能是源于垂体和卵巢对Ghrelin、GnRH的“需求”，并通过自身细胞以自分泌或旁分泌的方式来产生。AR阳性细胞的存在说明垂体和卵巢细胞也接受雄激素的调控，AR在垂体是D60阶段高表达，与绵羊相同；而AR在卵巢随着卵泡发育，在基质细胞和颗粒细胞内表达量增多。FSHR、LHR、Ghrelin、GHR阳性细胞在各月龄山羊的卵巢内分布位置因日龄不同而呈现较大差异。特别是在刚出生的D0阶段存在明显差异。在刚出生时集中分布在不规则原始卵泡的卵母细胞内，但随月龄增长，是在少数次级卵泡上存在，D30-180阶段常在1-2个生长卵泡上分布。当次级卵泡发生闭锁，则可在卵泡壁上见有环形排列的Ghrelin、GHR阳性细胞均匀分布。卵巢内动脉管壁的平滑肌上呈GHR、FSHR、LHR、GnRHR、GnRH阳性，而Ghrelin在动脉管壁周围的结缔组织呈强阳性。几种物质的mRNA表达量与组化结果变化趋势基本相近，结论：垂体内的FSH、LH、GH、Ghrelin、GnRH、GnRHR在生后发育过程中阳性细胞分布及mRNA表达量与生长阶段密切相关，几种激素可能协同调控垂体自身及卵巢等器官的功能活动。FSHR、LHR、Ghrelin、GnRHR、GHR在卵巢内分布的差异性说明其对于卵泡发育过程中调控随机体生长而异，其细胞内的mRNA是否表达相应的蛋白与卵泡发育相关联。垂体和卵巢还可以通过自身细胞以自分泌或旁分泌的方式产生Ghrelin、GnRH。
王琳[4]（2010）在《Ghrelin对大鼠下丘脑—垂体—性腺的影响及其机理研究》文中认为目的:探讨Ghrelin、GHS-R1a在下丘脑-垂体-性腺上的定位以及Ghrelin mRNA在其上的表达。分析Ghrelin mRNA和GHS-R1a mRNA在不同发情周期大鼠下丘脑-垂体-卵巢上的表达丰度。研究外源性Ghrelin对促性腺激素、性腺激素的分泌及其基因表达的影响。从而揭示Ghrelin对大鼠生殖轴的作用途径和机理。方法:（1）分离成年SD大鼠的下丘脑、垂体、卵巢和睾丸,经4%多聚甲醛固定,制成石蜡切片,采用免疫组织化学方法观察Ghrelin及其受体GHS-R1a在上述组织中的定位。（2）使用地高辛标记的Ghrelin寡核苷酸探针,采用原位杂交方法观察Ghrelin mRNA在下丘脑、垂体、卵巢和睾丸中的表达。（3）实时荧光定量PCR法分析Ghrelin mRNA和GHS-R1a mRNA在不同发情周期大鼠下丘脑、垂体、卵巢上的表达丰度。（4）采用1%的戊巴比妥钠1mL对大鼠进行腹腔注射,麻醉后固定于大鼠脑立体定位仪,采用不同剂量的Ghrelin（0.3nmol、1nmol、3nmol和生理盐水对照组）对雄性大鼠和不同发情周期大鼠进行侧脑室注射,15 min后断头采血,酶联免疫分析法测血清促黄体素、促卵泡素浓度,放射免疫分析法测血清睾酮、雌激素和孕酮的浓度。（5）分离试验四大鼠的下丘脑、垂体、卵巢和睾丸,实时荧光定量PCR法分析FSH、LH、GnRH、AR、ERβ和PRA+B mRNA表达丰度。（6）成年雄性大鼠和25 d的雌性大鼠断头处死,收集睾丸间质细胞、黄体细胞和颗粒细胞于CO2培养箱内培养6 h,收集培养液和细胞,采用酶联免疫、放射免疫分析法测培养液中睾酮、雌激素和孕酮的浓度,实时荧光定量PCR法分析AR、ERβ和PRA+BmRNA的表达丰度。结果:（1）Ghrelin与其受体GHS-R1a在下丘脑弓状核、腹内侧核、正中隆起,腺垂体,睾丸间质细胞、精母细胞、睾丸支持细胞,卵母细胞等中均有分布。（2）在下丘脑、垂体、睾丸中,Ghrelin mRNA显示和Ghrelin一致的分布方式,在卵巢中,显示出差异性表达。（3）Ghrelin和GHS-R1a在不同发情周期大鼠的下丘脑、垂体中均有表达,且其表达丰度随发情周期的变化而变化。在卵巢中仅发现Ghrelin mRNA表达,在整个发情周期均未检测到GHS-R1a mRNA表达。（4）侧脑室注射Ghrelin能抑制促性腺激素、性腺激素的分泌,其作用效果与所处发情周期、注射的剂量、性别有关。（5）侧脑室注射Ghrelin显着抑制GnRH mRNA、FSH mRNA、LH mRNA、ERβmRNA、PRA+B mRNA、AR mRNA的表达,其抑制效果与注射剂量与所处发情周期有关。（6）在体外,Ghrelin显着抑制孕酮、雌激素的分泌和ERβmRNA、PRA+B mRNA的表达。但对睾酮的分泌、AR mRNA的表达不起作用。结论:Ghrelin、GHS-R1a和Ghrelin mRNA在大鼠下丘脑、垂体和性腺上均有分布,Ghrelin通过与其受体相互作用,在中枢和外周水平上抑制大鼠促性腺激素和性腺激素的分泌和促性腺激素释放激素、促性腺激素和性腺激素受体基因的表达,且这种抑制作用受发情周期、剂量、性别的限制。
周春宝[5]（2009）在《苏姜猪初情期启动基因的发育性变化及差异显示研究》文中研究指明初情期是动物首次出现发情排卵的年龄,是开始获得繁殖能力的标志。初情期的启动,是由下丘脑GnRH神经元控制。从目前的研究报道看,初情期启动的机制实际上是GnRH脉冲式释放的调控,是非类固醇介导的中枢机制,调控因素包括神经肽、神经递质、神经类固醇。主要参与调控GnRH释放的神经肽有鸦片肽、NPY、促生长激素神经肽（Galanin）、促皮质激素释放激素（CRF）；神经递质有去甲肾上腺素（NE）、多巴胺、5-羟色胺、褪黑激素、Y氨基丁酸（GABA）,但其具体调控机制还需进一步研究探讨。目前,关于初情期启动相关基因受体NPY-Y1、GPR54、Ob-Rb基因的研究报道较少,特别是关于他们对初情期启动的调控机制几乎没有报道。本研究系统的研究初情期启动相关基因受体NPY-Y1、GPR54、Ob-Rb基因在下丘脑-垂体-卵巢内的组织定位及其组织发育性变化,目的是为深入研究探讨NPY-Y1、GPR54、Ob-Rb在初情期启动中扮演的角色。同时本实验还采用mRNA差异显示（mRNA DD）技术对猪初情期启动的关键因子做进一步的研究,以筛选与猪初情期启动相关的重要基因。主要研究结果如下：1.根据GenBank发表的序列设计NPY-Y1、GPR54、Ob-Rb基因特异性引物,采用反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）扩增出NPY-Y1、GPR54、Ob-Rb基因的部分cDNA序列,扩增产物克隆入pGEM-T easy载体中进行序列测定。结果：与发表的猪NPY-Y1、GPR54、Ob-Rb基因序列（NO.AF106081,NO.DQ459346,NO.AF092422）同源性均为100%,说明所扩增的序列为本实验所要的,为后续研究奠定了基础。2.用原位杂交技术检测苏姜猪母猪初情期前后NPY-Y1 mRNA在下丘脑、垂体和卵巢的分布定位。结果：在苏姜猪初情期前后下丘脑、垂体和卵巢三种组织中,均检测到NPY-Y1 mRNA阳性杂交信号。下丘脑的阳性杂交信号主要集中在丘脑室旁核和下丘脑的弓状核、室旁核、室周核等处；在垂体中分布相对密集；各级卵泡颗粒细胞和内膜细胞中均有阳性杂交信号,间质中也有少量的杂交信号。在三种组织中NPY-Y1 mRNA杂交信号均初情期较弱,初情期前相对较强。结果可以初步证明NPY-Y1在下丘脑-垂体-卵巢轴对雌性生殖的调节中具有关键的调控作用,并且对下丘脑-垂体-卵巢轴具有调控作用。3.用原位杂交技术检测苏姜猪母猪初情期前后GPR54 mRNA在下丘脑、垂体和卵巢的分布定位。结果：在苏姜猪初情期前后下丘脑、垂体和卵巢三种组织中,均检测到GPR54 mRNA阳性杂交信号。下丘脑的阳性杂交信号主要集中在弓状核和腹内侧核中,其它区也有一定的表达；在垂体中分布相对密集；各级卵泡颗粒细胞和内膜细胞中均有阳性杂交信号,间质中也有少量的杂交信号,大卵泡的阳性率明显高于小卵泡。在三种组织中GPR54 mRNA杂交信号均初情期较强,初情期前相对较弱些。结果可以初步证明GPR54在下丘脑-垂体-卵巢轴对雌性生殖的调节中具有关键的调控作用,并且对下丘脑-垂体-卵巢轴具有调控作用。4.用免疫组织化学的方法测定苏姜猪母猪初情期前后下丘脑、垂体、卵巢内Ob-Rb的分布及定位。结果：Ob-Rb阳性颗粒广泛分布于下丘脑,尤其是弓状核；垂体中Ob-Rb阳性颗粒主要集中于垂体前叶细胞；卵巢中Ob-Rb阳性颗粒出现在各级卵泡的颗粒细胞,而卵母细胞没有阳性颗粒。结果可以初步证明Ob-Rb在下丘脑-垂体-卵巢轴对雌性生殖的调节中也具有关键的调控作用。5.用荧光定量PCR技术检测苏姜猪初生、60、120、初情期、180日龄五个不同发育阶段的下丘脑、垂体和卵巢三种组织中NPY-Y1、GPR54、Ob-Rb mRNA的表达丰度变化。结果：（1）下丘脑、垂体与卵巢内NPY-Y1 mRNA表达量从初生到初情期表达量逐渐下降,在初情期达到最低,初情期后呈上升趋势。下丘脑内各个时期NPY-Y1 mRNA表达量均存在显着差异（P<0.05）,垂体内120日龄与180日龄之间NPY-Y1 mRNA表达量差异不显着（P>0.05）,其它时期NPY-Y1 mRNA表达量均显着差异（P<0.05）,卵巢内初情期与180日龄之间NPY-Y1 mRNA表达量差异不显着（P>0.05）,其它时期NPY-Y1 mRNA表达量均显着差异（P<0.05）。（2）下丘脑、垂体与卵巢内GPR54 mRNA表达量均从初生到初情期表达量逐渐上升,在初情期达到最高,初情期后呈下降趋势。下丘脑内初情期与初生、180日龄的GPR54 mRNA表达量差异均达到显着水平（P<0.05）,垂体内初情期与初生、60日龄、180日龄的GPR54 mRNA表达量差异均达到显着水平（P<0.05）,卵巢内初情期与初生、60日龄、120日龄、180日龄的GPR54 mRNA表达量差异均达到显着水平（P<0.05）。（3）下丘脑、垂体与卵巢内Ob-Rb mRNA发育性变化模式与NPY-Y1基本相同,从初生到初情期表达量逐渐下降,在初情期达到最低,初情期后呈上升趋势。下丘脑内120日龄、初情期与180日龄之间Ob-Rb mRNA表达量差异不显着（P>0.05）,其它时期NPY-Y1 mRNA表达量均显着差异（P<0.05）,垂体内60日龄与120日龄之间Ob-Rb mRNA表达量差异不显着（P>0.05）,其它时期NPY-Y1 mRNA表达量均显着差异（P<0.05）,卵巢内初情期与180日龄之间Ob-Rb mRNA表达量差异不显着（P>0.05）,其它时期Ob-Rb mRNA表达量均显着差异（P<0.05）。结果初步显示了三种受体在猪下丘脑-垂体-卵巢生殖轴中不同发育时期的变化,并且证明发育时期中NPY对GnRH释放起到是抑制作用,而leptin对GnRH起释放作用,低剂量的leptin可促进GnRH-LH的分泌,高浓度则抑制其分泌,这为以后的研究提供了可靠的科学数据。6.采用mRNA差异显示技术、Reverse Northern技术以及半定量分析技术,对不同发育时期猪下丘脑差异表达的ESTs进行分离,共得到cDNA差异片断20条,半定量分析显示：其中5条差异条带在出生时呈表达增强相,11条差异条带在初情期时呈表达增强相,其余4条在性成熟时呈表达增强相。测序结果与GenBank数据库比对,二个cDNA与已知基因同源,其余大部分都是功能未知的EST序列。经Reverse Northern验证,有9个cDNA呈阳性,可用于下一步探针定位及表达的研究。
谢菲,姬秋和,黄威权,王艳霞[6]（2008）在《大鼠肝促性腺激素释放激素受体的定位研究》文中指出目的探讨大鼠肝是否表达促性腺激素释放激素（GnRH）受体,为GnRH能否参与肝代谢功能的调节提供形态学依据。方法采用兔抗GnRH的抗独特型抗体的免疫组织化学SABC法及地高辛标记探针的原位分子杂交法,对5例大鼠肝GnRH受体表达进行研究。结果大鼠肝细胞既呈GnRH受体阳性又有GnRH受体mRNA杂交信号。GnRH受体阳性物质和GnRH受体mRNA杂交信号物质均分布在大鼠肝细胞的细胞质,细胞核未检测到GnRH受体阳性物质及GnRH受体mRNA杂交信号。不同部位的肝细胞其GnRH受体免疫反应强度和GnRH受体mRNA杂交信号强度存在差别。结论大鼠肝细胞能表达GnRH受体,不同部位的肝细胞对GnRH受体表达水平存在差异。
谢菲[7]（2008）在《大鼠肝细胞GnRH受体的表达及其影响的研究》文中进行了进一步梳理许多研究已经证明促性腺激素释放激素及其受体存在于下丘脑-垂体轴以外的器官和组织,例如胎盘滋养层细胞、前列腺、胰腺及一些肿瘤组织中[1.2.3]。Chegini等[4]首次证明了子宫平滑肌细胞上存在GnRH及其受体的mRNA。我们先前的研究也报道了胃肠胰系统能自身合成GnRH[5],而且证实胃肠胰系统及甲状腺均含有GnRH受体免疫反应阳性物质[6.7]。GnRH在下丘脑-脑垂体轴外生成的同时,其亦发挥生物学效应,Gurrie等[8]发现GnRH可以使胎盘滋养层细胞内[Ca2+]明显升高,进而参与细胞内的信号传递过程。Tache等[9]发现脑室及静脉注射GnRH类似物后,胃液的pH值升高,其作用机制可能是GnRH类似物通过抑制迷走神经而发挥间接的调节作用。近年来在临床上观察到药理剂量的GnRH类似物可导致糖代谢紊乱,但其发生机制尚不明确,有人认为可能与使用GnRH类似物时机体的性激素改变有关;GnRH对葡萄糖代谢是否存在直接作用未见报道。肝脏是物质代谢的主要器官,同时胃肠胰系统能自身合成GnRH,因此,肝脏细胞是否存在GnRH受体,GnRH是否在GnRH受体介导下对肝糖代谢产生影响是值得关注的问题。研究方法:取大鼠肝脏组织制成切片,运用免疫组织化学SABC法和原位杂交技术,观察大鼠肝脏细胞是否存在GnRH受体;用原代培养法培养大鼠肝细胞,GnRH受体免疫组化、糖原染色比较不同浓度葡萄糖培养液对GnRH受体表达的影响。研究结果:（1）:大鼠肝细胞呈GnRH受体免疫反应阳性,阳性反应物质分布在细胞的细胞膜和细胞浆中,细胞核呈阴性反应。一个肝小叶内,靠近中央静脉的肝细胞,其GnRH受体免疫反应较强,着色较深,远离中央静脉的肝细胞,其GnRH受体的免疫反应较弱,着色较浅。（2）:大鼠肝细胞GnRH受体的mRNA杂交信号物质呈深棕色,背景不着色,反差明显。信号物质分布于细胞质,细胞核未检测到GnRH受体mRNA杂交信号,呈阴性反应。一个肝小叶内,靠近中央静脉的肝细胞,其GnRH受体mRNA杂交信号较强,着色较深,远离中央静脉的肝细胞,其GnRH受体mRNA杂交信号较弱,着色较浅。（3）:用SABC免疫组织化学染色法分别对葡萄糖浓度1g/L、葡萄糖浓度2g/L培养液培养的大鼠肝细胞行GnRH受体的免疫组织化学染色;镜下观察两种葡萄糖浓度培养液培养条件下GnRH受体的表达,用图像分析软件对其进行光密度值分析,结果显示正常葡萄糖浓度（1g/L）培养时肝细胞GnRH受体的表达强度明显高于高糖培养液（2g/L）中肝细胞的表达（P<0.01）。结论:（1）大鼠肝细胞呈GnRH受体免疫反应阳性,又有GnRH受体mRNA杂交信号,说明大鼠肝脏在转录和翻译水平能自身合成GnRH受体,同时此部位GnRH受体的分布具有中央静脉旁肝细胞增多的特点。（2）GnRH受体的表达强度与细胞外液葡萄糖浓度有关,表现为正常葡萄糖浓度培养时肝细胞GnRH受体表达强度明显高于高糖浓度培养,说明高浓度葡萄糖使肝细胞GnRH受体表达下调,提示肠胰系统产生的GnRH可能通过其在肝细胞上的受体调节糖代谢。
陈榕[8]（2008）在《促性腺激素释放激素及其受体在糖尿病大鼠肠道、胰腺中表达的研究》文中研究指明有研究表明药理剂量的促性腺激素释放激素（GnRH）类似物即可导致糖代谢紊乱,而在与葡萄糖代谢密切相关的消化系统又广泛存在GnRH及其受体。肠道和胰腺合成分泌的GnRH是否与葡萄糖代谢有关,其是否会以自分泌或旁分泌的方式作用于肠道和胰腺GnRH受体（GnRH-R）,并通过影响肠道吸收、运动功能或调节其他肠道激素如:胰高血糖素、胰高血糖素样多肽-1（GLP-1）等的分泌而对葡萄糖代谢产生影响,这些问题尚有待探讨。目的:探讨肠道和胰腺的GnRH及其受体、胰高血糖素原（PG）和GLP-1受体在糖尿病病理状态下的变化,肠道、胰腺GnRH及其受体、胰高血糖素原和GLP-1受体的表达之间的相关性,为进一步研究GnRH类似物在临床应用中出现的葡萄糖代谢紊乱的机制以及糖尿病的病理生理过程奠定基础。方法:采用免疫组织化学方法观察了自发性2型糖尿病GK大鼠肠道和胰腺GnRH及其受体蛋白的表达及分布特点,并采用实时荧光定量PCR方法,研究了GK大鼠及正常Wistar大鼠GnRH及其受体、胰高血糖素原和GLP-1受体的mRNA在不同肠段和胰腺在灌服葡萄糖（2 g/kg）后3 h时的表达差异。结果:1、免疫组织化学染色显示糖尿病GK大鼠空肠、回肠、结肠和胰腺均有GnRH及GnRH-R表达,且其分布特点与正常大鼠相一致。2、糖尿病大鼠空肠GnRH、GnRH-R、胰高血糖素原和GLP-1受体的mRNA相对表达量均低于正常大鼠（P<0.05）。3、糖尿病大鼠回肠GnRH mRNA表达量低于正常大鼠（P<0.05）,回肠GnRH-R、胰高血糖素原和GLP-1受体的mRNA表达量在两组间差异无统计学意义。4、糖尿病大鼠结肠GLP-1受体mRNA相对表达量显着低于正常大鼠（P<0.05）,而结肠GnRH及其受体和胰高血糖素原的mRNA表达量在两组间差异无统计学意义。5、糖尿病大鼠胰腺胰高血糖素原和GLP-1受体mRNA相对表达量显着低于正常大鼠（P<0.05）,而胰腺GnRH和GnRH-R mRNA表达量在两组间差异无统计学意义。6、大鼠空肠GnRH mRNA表达量与胰高血糖素原mRNA的表达量呈正相关（r=0.883,P<0.05）,大鼠空肠GnRH mRNA相对表达量与其空腹血糖、OGTT 3h血糖值均呈负相关（r=-0.72和r=-0.82,P<0.05）,大鼠回肠GnRH mRNA相对表达量与其OGTT 3h血糖值呈负相关（r=-0.9,P<0.05）,大鼠空肠GnRH-R与GLP-1受体mRNA相对表达量呈正相关（r=0.91,P<0.05）。结论:糖尿病大鼠肠道和胰腺GnRH及其受体免疫阳性物质分布与正常大鼠相一致。糖尿病大鼠部分肠道GnRH及其受体mRNA在灌服葡萄糖（2 g/kg）后3 h时下调,大鼠空肠GnRH与胰高血糖素原mRNA的表达量,以及空肠、回肠的GnRH mRNA水平与OGTT 3 h血糖值均呈现较好的相关性,提示空肠和回肠的GnRH可能与葡萄糖代谢关系密切,其相关机制有待进一步研究。
曹宏伟[9]（2008）在《进食和去势对大鼠空肠、胰腺促性腺激素释放激素及其受体表达影响的研究》文中进行了进一步梳理研究表明促性腺激素释放激素（GnRH）类似物应用于前列腺癌患者行去势治疗时可导致患者出现糖代谢紊乱;我们先前的研究显示在与葡萄糖代谢密切相关的消化系统广泛存在GnRH及其受体,进食以及去势是否会影响肠道和胰腺合成分泌GnRH,后者是否会以自分泌或旁分泌的方式作用于肠道和胰腺GnRH受体（GnRH-R）,并通过影响、运动功能或调节其它肠道激素如:胰高血糖素、胰高血糖素样多肽-1（GLP-1）等的分泌而对葡萄糖代谢产生影响,这些问题的探讨有利于深入理解肠胰系统GnRH在糖代谢中的作用。第一部分手术去势和皮下注射GnRH类似物对大鼠空肠、胰腺GnRH及其受体表达的免疫组织化学定位目的:了解手术去势和皮下注射GnRH类似物12周对雄性SD大鼠空肠及胰腺GnRH及其受体免疫组织化学定位的影响,为进一步研究GnRH类似物在临床应用中出现的葡萄糖代谢紊乱的机制奠定基础。方法:采用免疫组织化学方法观察了手术去势和皮下注射GnRH类似物亮丙瑞林（100ug/Kg）12周后大鼠在灌葡萄糖（2 g/Kg）后3 h时GnRH及其受体蛋白的免疫组织化学定位。结果:1.免疫组织化学结果显示手术去势大鼠空肠、胰腺GnRH及其受体分布与正常大鼠相同。2.免疫组织化学结果显示皮下注射GnRH类似物组大鼠空肠、胰腺GnRH及其受体分布与正常大鼠相同。结论:手术去势和皮下注射GnRH类似物12周对大鼠空肠、胰腺GnRH及其受体分布可能无影响。第二部分灌服葡萄糖溶液后大鼠空肠和胰腺GnRH及其受体mRNA的表达目的:通过观察灌服葡萄糖溶液后不同时间点SD大鼠空肠和胰腺GnRH及其受体mRNA表达的变化,以期了解肠胰系统GnRH与糖代谢之间的关系。方法:采用实时荧光定量PCR方法,观察了SD大鼠灌服葡萄糖（2 g/Kg）0 min,15min,30min时空肠和胰腺的GnRH及其受体mRNA的表达。结果:1.与空腹组相比,灌服葡萄糖15min组和30min组大鼠空肠GnRH mRNA相对表达量降低（P<0.05）,而GnRH受体mRNA表达量在三组间无差异。2.与空腹组相比,灌服葡萄糖后15min组大鼠胰腺GnRH mRNA表达量降低（P<0.05）,灌服葡萄糖后30min时胰腺GnRH mRNA表达量与空腹组比较未见差异,同时GnRH受体在三组间无差异。结论:本研究首次对SD大鼠在灌葡萄糖（2g/Kg）后不同时间点的GnRH及其受体mRNA在肠道和胰腺表达的差异进行了比较,发现灌服葡萄糖早期大鼠空肠和胰腺GnRH mRNA相对表达量降低,说明空肠和胰腺的GnRH可能与葡萄糖代谢有关,其相关机制有待进一步研究。第三部分手术去势对大鼠空肠、胰腺GnRH及其受体mRNA表达的影响目的:了解手术去势12周后雄性SD大鼠空肠及胰腺GnRH及其受体表达的变化,为进一步研究GnRH类似物在临床应用中出现葡萄糖代谢紊乱的机制奠定基础。方法:采用实时荧光定量PCR方法,观察了手术去势12周对大鼠空肠和胰腺GnRH及其受体mRNA在灌服葡萄糖（2 g/Kg）3h时表达的影响。结果:去势大鼠空肠和胰腺GnRH、GnRH受体mRNA的相对表达量与对照组相比未见差异。结论:手术去势对大鼠灌服葡萄糖（2 g/Kg）3 h时GnRH及其受体mRNA在空肠、胰腺的表达无影响。第四部分皮下注射GnRH类似物对大鼠空肠、胰腺GnRH及其受体mRNA表达的影响目的:探讨皮下注射GnRH类似物亮丙瑞林（100ug/Kg）12周后大鼠空肠、胰腺GnRH及其受体、胰高血糖素原（PG）和GLP-1受体mRNA表达的变化,为深入研究GnRH类似物在临床应用中出现的葡萄糖代谢紊乱的机制奠定基础。方法:采用实时荧光定量PCR方法,研究了皮下注射GnRH类似物亮丙瑞林（100ug/Kg）12周后大鼠空肠及胰腺GnRH及其受体、胰高血糖素原和GLP-1受体mRNA在灌服葡萄糖（2 g/Kg）3 h时的表达差异。结果:1.与皮下注射生理盐水组大鼠相比较,皮下注射GnRH组在灌服葡萄糖（2g/Kg）前空腹血糖升高（P<0.05）,其余各时间点血糖相比较均未见差异,同时皮下注射GnRH类似物组的胰岛素水平在灌葡萄糖（2g/Kg）0h和0.5h时显着升高（P<0.05）,其余各时间点胰岛素水平未见差异。2.空肠和胰腺GnRH及其受体、胰高血糖素原（PG）和GLP-1受体mRNA表达量在两组间无差异。3.包括GnRH类似物注射组和对照组在内的所有大鼠的空肠GnRH mRNA表达量与胰高血糖素原mRNA的表达量呈正相关（r=0.959, P<0.01）。结论:皮下注射GnRH类似物12周使大鼠空腹血糖和胰岛素升高以及灌糖后早期胰岛素分泌增加,结合大鼠空肠GnRH mRNA表达量与胰高血糖素原mRNA的表达量呈正相关,提示GnRH类似物影响糖代谢的机制可能与肠胰系统的GnRH有关,其作用机制有待进一步研究。小结:本实验显示,灌服葡萄糖早期大鼠空肠和胰腺GnRH mRNA相对表达量下降;皮下注射GnRH12周使大鼠空腹血糖升高,同时使大鼠空腹和早期胰岛素分泌增加,但手术去势大鼠无此改变。结合皮下注射GnRH大鼠和正常大鼠中空肠GnRH mRNA表达量与胰高血糖素原mRNA的表达量呈正相关的证据,提示肠胰系统的GnRH可能与糖代谢有关,同时临床报道的GnRH类似物影响糖代谢的机制也可能与其有关,其作用机制有待进一步研究。
于辉[10]（2006）在《大鼠胃和下颌下腺卵泡刺激素的研究》文中提出经典理论认为卵泡刺激素（follicle-stimulating hormone，FSH）是由垂体前叶嗜碱性细胞分泌的一种糖蛋白生殖激素，由α、β亚单位构成，其分泌受GnRH的调控，经血液循环作用于性腺，进而调节性腺的发育和配子的形成，对性激素的产生和生殖功能起重要调节作用。卵泡刺激素受体（follicle-stimulating hormone receptor，FSHR）是一种具有七个跨膜结构的G蛋白耦联受体，主要分布于睾丸支持细胞和卵巢颗粒细胞，其N端拥有一个大的细胞外结构域，用于结合FSH。但是大量实验证据表明，FSH及其受体FSHR可广泛存在于垂体性腺轴外，如FSH可存在非生殖系统的胰腺等组织器官，并对这些组织和器官起调控作用。 我们先前的研究还发现，在大鼠的消化系统广泛存在有GnRH及其受体，并且其基因序列分别下丘脑及垂体GnRH及其受体的基因序列一致，说明大鼠的消化系统能自身合成GnRH及其受体，同时这些组织或细胞是GnRH作用的靶细胞。GnRH类似物可明显促进大鼠下颌下腺对神经生长因子的分泌，还可抑制大鼠胃酸的分泌，但是作为其下游激素的FSH及其受体是否也存在于大鼠消化系统，未见报道。
二、大鼠胰腺促性腺激素释放激素受体mRNA的原位杂交（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、大鼠胰腺促性腺激素释放激素受体mRNA的原位杂交（论文提纲范文）
（1）CircAkap17b作为miR-7家族的分子海绵调控大鼠腺垂体FSH分泌机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第1章 调控FSH分泌的研究进展 |
| 1 垂体的结构和功能 |
| 1.1 垂体的结构 |
| 1.2 垂体的功能 |
| 2 FSH的结构和功能 |
| 3 FSH的调控 |
| 3.1 GnRH脉冲频率 |
| 3.2 激活素，卵泡抑素和抑制素 |
| 3.3 类固醇激素 |
| 第2章 miRNA与circRNA生物学功能及其在繁殖中的作用 |
| 1 miRNA的生物学功能和在繁殖中的作用 |
| 1.1 miRNA的发现 |
| 1.2 miRNA的生物合成和作用机制 |
| 1.3 垂体miRNA研究进展 |
| 2 circRNA的生物学功能和在在繁殖中的作用 |
| 2.1 CircRNA的发现 |
| 2.2 CircRNA生物发生机制 |
| 2.3 CircRNA的生物学功能 |
| 2.4 CeRNA机制 |
| 2.5 CircRNA在生殖中的调控作用 |
| 2.5.1 垂体中的circRNA |
| 2.5.2 下丘脑中的circRNA |
| 2.5.3 CircRNA与男性生殖疾病 |
| 2.5.4 CircRNA与女性生殖疾病 |
| 第二篇 研究内容 |
| 第1章 miR-7家族对FSH分泌的调控作用 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 试剂及耗材 |
| 1.1.3 主要仪器设备 |
| 1.1.4 主要溶液的配制 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 SD大鼠腺垂体原代细胞的获取与培养 |
| 1.2.2 siRNA, miRNA mimic和miRNA inhibitor的细胞转染 |
| 1.2.3 RNA 提取和质控 |
| 1.2.4 RNA反转录获得cDNA |
| 1.2.5 实时荧光定量PCR |
| 1.2.6 报告质粒的构建 |
| 1.2.7 双荧光素酶实验 |
| 1.2.8 统计分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 miR-7a-5p和FSHβ 3'UTR之间互补区域的预测和验证 |
| 2.2 大鼠不同发育时期以及不同组织中miR-7a-5p的表达水平 |
| 2.3 miR-7a-5p转染效率及转染后的影响 |
| 2.4 miR-7a-5p过表达/阻断对腺垂体细胞FSH分泌的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第2章 CircRNA作为miR-7家族分子海绵调控FSH的分泌 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 主要试剂及耗材 |
| 1.1.3 主要仪器设备 |
| 1.1.4 主要溶液的配制 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 SD大鼠繁育和原代细胞细胞以及垂体瘤细胞系培养 |
| 1.2.2 RNA提取 |
| 1.2.3 核酸制备和qRT-PCR |
| 1.2.4 RNase R 处理 |
| 1.2.5 载体构建和细胞转染 |
| 1.2.6 荧光原位杂交（FISH） |
| 1.2.7 RIP RNA免疫沉淀测定 |
| 1.2.8 萤光素酶活性测定 |
| 1.2.9 FSH检测 |
| 1.2.10 统计分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 大鼠垂体细胞中circAkap17b的鉴定与表达特征 |
| 2.2 CircAkap17b在大鼠垂体前叶的表达模式 |
| 2.3 CircAkap17b过表达/阻断对FSHβ表达和FSH分泌的影响 |
| 2.4 CircAkap17b可以作为miR-7的分子海绵 |
| 2.5 miR-7b通过靶向FSHβ抑制FSH分泌 |
| 2.6 CircAkap17b通过miR-7-FSHβ途径促进FSH分泌 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 导师简介 |
| 作者简介 及在学期间所取得的科研成果 |
| 作者简介 |
| 在学期间按所取得的研究成果 |
| 致谢 |
（2）山羊下颌腺和胰腺中GnRH及GnRHR在生后发育时期变化规律的研究（论文提纲范文）
| 符号说明 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 1 引言 |
| 1.1 GnRH 的研究进展 |
| 1.1.1 GnRH 的结构及种类 |
| 1.1.2 GnRH 的来源、分布和调节方式 |
| 1.1.3 GnRH 在下丘脑-垂体-性腺轴中的研究进展 |
| 1.1.4 GnRH 在下颌腺和胰腺中的研究进展 |
| 1.2 GnRHR 的研究进展 |
| 1.2.1 GnRHR 的结构及种类 |
| 1.2.2 GnRHR 在下丘脑-垂体-性腺轴中的研究进展 |
| 1.2.3 GnRHR 在下颌腺和胰腺中的研究进展 |
| 1.3 GnRH 对 GnRHR 的信号调节 |
| 1.4 下颌腺生理结构及分泌激素的种类 |
| 1.5 胰腺生理结构及相关生理功能 |
| 1.6 济宁青山羊的生物学特征 |
| 1.7 本研究的目的和意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 试验动物 |
| 2.1.2 试验地点 |
| 2.1.3 主要试剂与试验用品 |
| 2.1.3.1 主要试剂及来源 |
| 2.1.3.2 试验相关的主要仪器 |
| 2.1.3.3 主要生物学数据库和相关生物学软件 |
| 2.1.3.4 主要溶液及相应的配置方法 |
| 2.1.3.5 试验器材的准备 |
| 2.2 SABC 法检测下颌腺和胰腺中 GnRH 和 GnRHR 免疫阳性细胞的分布特点 |
| 2.2.1 组织切片制备 |
| 2.2.2 苏木精-伊红染色观察下颌腺和胰腺的形态学结构 |
| 2.2.3 免疫组织化学（SABC）法 |
| 2.2.4 对照试验 |
| 2.2.5 拍照和图像分析 |
| 2.3 Western Blot 鉴定下颌腺和胰腺中 GnRH 和 GnRHR 蛋白片段大小 |
| 2.3.1 颌下腺和胰腺全蛋白的获得 |
| 2.3.2 蛋白样品变性 |
| 2.3.3 所用仪器准备 |
| 2.3.4 电泳凝胶的制备 |
| 2.3.5 半干式转膜 |
| 2.4 酶联免疫吸附法检测下颌腺和胰腺中 GnRH 及 GnRHR 蛋白相对含量的变化 |
| 2.4.1 总蛋白的提取 |
| 2.4.2 GnRH 蛋白相对含量的测定 |
| 2.4.2.1 试剂 |
| 2.4.2.2 方法步骤 |
| 2.4.3 GnRHR 蛋白相对含量的测定 |
| 2.4.3.1 试剂 |
| 2.4.3.2 方法步骤 |
| 3 结果和分析 |
| 3.1 济宁青山羊生后发育阶段下颌腺和胰腺的形态学变化 |
| 3.1.1 济宁青山羊生后发育阶段下颌腺的形态学变化 |
| 3.1.1.1 颌下腺的形态学观察 |
| 3.1.1.2 颌下腺的发育性变化 |
| 3.1.2 济宁青山羊生后发育阶段胰腺的形态学变化 |
| 3.1.2.1 胰腺的形态学观察 |
| 3.1.2.2 胰腺的发育性变化 |
| 3.2 生后发育阶段下颌腺和胰腺中 GnRH 和 GnRHR 免疫阳性细胞发育性变化 |
| 3.2.1 GnRH 和 GnRHR 免疫阳性细胞在下颌腺中的分布规律 |
| 3.2.1.1 GnRH 免疫阳性细胞在下颌腺中的分布特点和发育性变化 |
| 3.2.1.2 GnRHR 免疫阳性细胞在下颌腺中的分布特点和发育性变化 |
| 3.2.2 生后发育阶段 GnRH 和 GnRHR 免疫阳性细胞在胰腺中的分布规律 |
| 3.2.2.1 GnRH 免疫阳性细胞在胰腺中的分布特点和发育性变化 |
| 3.2.2.2 GnRHR 免疫阳性细胞在胰腺中的分布特点和发育性变化 |
| 3.3 下颌腺和胰腺中 GnRH 和 GnRHR 的 Western-Blot 结果 |
| 3.4 ELISA 检测结果 |
| 3.4.1 GnRH 和 GnRHR 蛋白在下颌腺中相对含量的变化规律 |
| 3.4.2 GnRH 和 GnRHR 蛋白在胰腺中相对含量的变化规律 |
| 4 讨论 |
| 4.1 下颌腺和胰腺的的发育性变化 |
| 4.1.1 下颌腺的发育性变化 |
| 4.1.2 胰腺的发育性变化 |
| 4.2 GnRH 和 GnRHR 下在颌腺和胰腺中的发育性变化 |
| 4.2.1 GnRH 和 GnRHR 在下颌腺中的发育性变化 |
| 4.2.2 GnRH 和 GnRHR 在胰腺中的发育性变化 |
| 5 结论 |
| 6 参考文献 |
| 7 致谢 |
| 8 攻读学位期间发表论文情况 |
（3）GnRH、GTH、GH及其受体在山羊垂体—卵巢轴中的发育性变化（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 1 前言 |
| 1.1 垂体的结构及生理功能 |
| 1.2 哺乳动物 FSH 和 LH 研究进展 |
| 1.2.1 促性腺激素的发现与来源 |
| 1.2.2 促性腺激素细胞的类型 |
| 1.2.3 黄体生成素的结构 |
| 1.2.4 黄体生成素的作用 |
| 1.2.5 卵泡刺激素的结构 |
| 1.2.6 卵泡刺激素的生理作用 |
| 1.2.7 FSH 和 LH 的临床应用 |
| 1.2.8 血清中促性腺激素含量分析 |
| 1.3 FSHR 和 LHR |
| 1.3.1 FSHR 和 LllR 的结构 |
| 1.3.2 FSHR 与 LHR 的信号转导 |
| 1.3.3 FSHR 与 LHR 在组织器官内的分布状况 |
| 1.4 Ghrelin |
| 1.4.1 Ghrelin 结构和调控机理 |
| 1.4.2 Ghrelin. 在组织器官内的分布状况 |
| 1.5 GnRH 与 GnRHR |
| 1.5.1 GnRH 结构及生理作用 |
| 1.5.2 GnRH 在组织器官内的分布 |
| 1.5.3 GnRH 受体 |
| 1.5.3.1 GnRHR 分类和结构 |
| 1.5.3.2 GnRHR 基因 |
| 1.5.3.3 GnRHR 在组织器官分布 |
| 1.6 生长激素的结构与功能 |
| 1.6.1 生长激素的结构与多态性 |
| 1.6.1.1 生长激素的结构 |
| 1.6.1.2 生长激素的生理功能 |
| 1.6.1.2.1 生长激素对糖代谢的影响 |
| 1.6.1.2.2 生长激素与蛋白质、脂肪代谢 |
| 1.6.1.2.3 生长激素的促进生长作用 |
| 1.6.1.2.4 GHRH 对 GH 调节 |
| 1.7 生长激素受体与雄激素受体 |
| 1.7.1 雄激素受体 |
| 1.7.2 生长激素受体(GHR)的结构特点 |
| 1.7.3 生长激素对卵泡生长和成熟的作用 |
| 1.7.4 GHR 在其他组织的分布 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 液体配制 |
| 2.2 菌株和载体 |
| 2.3 主要试剂和仪器 |
| 2.4 主要数据库及生物软件 |
| 2.5 试验方法 |
| 2.5.1 RNA 的提取 |
| 2.5.2 反转录 cDNA |
| 2.5.3 实时荧光定量 PCR |
| 2.5.4 小量质粒 DNA 制备 |
| 2.5.5 荧光定量 PCR 标准曲线的建立 |
| 2.5.6 Western blot 法检测蛋白 |
| 2.6 试验动物和样品采集 |
| 2.6.1 试验动物 |
| 2.6.2 样品采集 |
| 2.6.3 石蜡组织切片制备 |
| 2.6.4 试验前器材的准备 |
| 2.7 HE 染色 |
| 2.8 免疫组织化学染色 |
| 2.9 外周血中 FSH 和 LH 含量的测定 |
| 2.10 数据统计分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 生后发育及性周期过程中促性腺激素和性激素变化规律 |
| 3.2 垂体内 FSH、LH 阳性细胞的分布及 mRNA 表达 |
| 3.3 垂体内 GH、GHR 阳性细胞的分布及 mRNA 表达 |
| 3.4 垂体内 GnRHR、GnRH 阳性细胞的分布及 mRNA 表达 |
| 3.5 垂体和卵巢中 AR 的分布及 mRNA 表达 |
| 3.6 垂体和卵巢中 Ghrelin 的分布及 mRNA 表达 |
| 3.7 卵巢内 FSHR、LHR 分布及其 mRNA 差异表达 |
| 3.8 卵巢内 GHR 分布及其 mRNA 差异表达 |
| 3.9 卵巢内 GnRH、GnRHR 的分布及 mRNA 差异表达 |
| 3.10 山羊 LH 、 FSH 、 GnRHR 、 LHR 、 FSHR 、 ERα 、 ERβ 、 PR 、GAPDH mRNA实时荧光定量PCR标准曲线的建立 |
| 3.11 卵巢、垂体内LH、FSH、GnRH、GnRHR、LHR、FSHR、GH、GHR、AR、、Ghrelin、GAPDH的Western Blot分析结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 生后发育过程中 FSH、LH、E2和 P的分泌 |
| 4.2 生后发育过程中 E2与 FSH 之间的关系 |
| 4.3 不同繁殖性能山羊发情周期中 FSH、LH、E2和 P的分泌规律的比较分析 |
| 4.4 垂体内 FSH、LH 阳性细胞分布的发育性变化 |
| 4.5 GH 与 Ghrelin 细胞分布情况的发育性变化 |
| 4.6 GH 与 GHR 的发育性变化 |
| 4.7 生后发育过程中垂体内 GnRH 与 GH 阳性细胞分布规律分析 |
| 4.8 卵巢内 FSHR、LHR 的分布特点 |
| 4.9 Ghrelin 在卵巢上的分布特点 |
| 4.10 生后发育阶段 AR 在山羊垂体、卵巢中的分布特点 |
| 4.11 垂体和卵巢内 GnRH 与 GnRHR 的分布特点 |
| 4.12 标准曲线建立的意义与应用 |
| 5 结论 |
| 6 参考文献 |
| 7 附录 |
| 8 致谢 |
| 9 攻读学位期间发表论文情况 |
（4）Ghrelin对大鼠下丘脑—垂体—性腺的影响及其机理研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 目录 |
| 缩略词 |
| 文献综述 Ghrelin 与生殖的研究进展 |
| 1 Ghrelin 的发现背景及命名 |
| 2 Ghrelin 及其受体的分子结构 |
| 2.1 Ghrelin 的分子结构 |
| 2.2 Ghrelin 受体GHS-R 的分子结构 |
| 3 Ghrelin 在体内的分布 |
| 4 Ghrelin 的生理功能 |
| 4.1 调节生长素的分泌 |
| 4.2 调节胃肠道功能 |
| 4.3 调节摄食和能量代谢 |
| 4.4 调节心血管系统功能 |
| 4.5 对生殖的调节作用 |
| 4.5.1 调节激素分泌 |
| 4.5.2 对生殖细胞的调节 |
| 4.5.3 调节胚胎发育 |
| 4.5.4 调节动物发情 |
| 研究论文 Ghrelin 对大鼠下丘脑-垂体-性腺的影响及其机理研究 |
| 引言 |
| 第一章 Ghrelin 及其功能性受体GHS-R_(1a)在大鼠下丘脑-垂体-性腺上的定位 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.1.1 试验动物 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 溶液的配制 |
| 1.1.4 主要仪器设备 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.2.1 试验动物处理 |
| 1.2.2 组织切片制作 |
| 1.2.3 免疫组织化学步骤 |
| 1.2.4 观察并拍照 |
| 2 结果 |
| 2.1 Ghrelin 在下丘脑-垂体-性腺轴上的定位 |
| 2.1.1 Ghrelin 在下丘脑上的定位 |
| 2.1.2 Ghrelin 在垂体上的定位 |
| 2.1.3 Ghrelin 在睾丸上的定位 |
| 2.1.4 Ghrelin 在卵巢上的定位 |
| 2.2 GHS-R_(1a) 在大鼠下丘脑-垂体-性腺轴上的定位 |
| 2.2.1 GHS-R_(1a) 在下丘脑上的定位 |
| 2.2.2 GHS-R_(1a) 在垂体上的定位 |
| 2.2.3 GHS-R_(1a) 在卵巢上的定位 |
| 2.2.4 GHS-R_(1a) 在睾丸上的定位 |
| 3 分析与讨论 |
| 3.1 关于Ghrelin 在下丘脑、垂体、性腺中的分布 |
| 3.2 关于Ghrelin 受体在下丘脑、垂体、性腺中的分布 |
| 4 小结 |
| 第二章 Ghrelin mRNA 在大鼠下丘脑-垂体-性腺上的表达 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.1.1 试验动物 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 溶液的配制 |
| 1.1.4 主要仪器设备 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.2.1 试验动物处理 |
| 1.2.2 组织切片制作 |
| 1.2.3 地高辛标记的Ghrelin 寡核苷酸探针序列 |
| 1.2.4 切片的原位杂交检测 |
| 1.2.5 观察并拍照 |
| 2 结果 |
| 2.1 Ghrelin mRNA 在大鼠下丘脑上的表达 |
| 2.2 Ghrelin mRNA 在大鼠脑垂体上的定位 |
| 2.3 Ghrelin mRNA 在大鼠睾丸上的表达 |
| 2.4 Ghrelin mRNA 在大鼠卵巢上的表达 |
| 3 分析与讨论 |
| 3.1 关于Ghrelin mRNA 在下丘脑中的表达 |
| 3.2 关于Ghrelin mRNA 在垂体中的表达 |
| 3.3 关于Ghrelin mRNA 在睾丸中的表达 |
| 3.4 关于Ghrelin mRNA 在卵巢中的表达 |
| 4 小结 |
| 第三章 Ghrelin 及其受体mRNA 在不同发情周期中的表达 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.1.1 试验动物 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 溶液的配制 |
| 1.1.4 主要仪器设备 |
| 1.1.5 组织取材 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.2.1 大鼠发情各阶段的阴道组织涂片观察 |
| 1.2.2 总RNA 的提取 |
| 1.2.3 RNA 完整性检测 |
| 1.2.4 RNA 浓度和纯度测定 |
| 1.2.5 引物的设计与合成 |
| 1.2.6 逆转录 |
| 1.2.7 实时荧光定量PCR |
| 1.2.8 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 标准曲线与溶解曲线 |
| 2.2 Ghrelin mRNA、GHS-R_(1a) mRNA 在下丘脑上的表达 |
| 2.3 Ghrelin mRNA、GHS-R_(1a) mRNA 在脑垂体上的表达 |
| 2.4 Ghrelin mRNA、GHS-R_(1a) mRNA 在卵巢上的表达 |
| 3 分析与讨论 |
| 3.1 Ghrelin mRNA 在生殖轴中的表达 |
| 3.2 GHS-R_(1a) mRNA 在生殖轴中的表达 |
| 4 小结 |
| 第四章 侧脑室注射Ghrelin 对大鼠促性腺激素和性腺激素分泌的影响 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.1.1 试验动物 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 溶液的配制 |
| 1.1.4 主要仪器设备 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.2.1 试验动物的分组与处理 |
| 1.2.2 大鼠的侧脑室注射 |
| 1.2.3 血样的采集 |
| 1.2.4 促性腺激素的测定 |
| 1.2.5 性腺激素的测定 |
| 1.2.6 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 不同剂量Ghrelin 侧脑室注射对成年雄性大鼠LH、FSH、T 分泌的影响 |
| 2.1.1 对LH 的影响 |
| 2.1.2 对FSH 的影响 |
| 2.1.3 对T 的影响 |
| 2.2 不同剂量Ghrelin 侧脑室注射对发情后期雌性大鼠LH、FSH、E_2、P_4 分泌的影响 |
| 2.2.1 对LH 的影响 |
| 2.2.2 对FSH 的影响 |
| 2.2.3 对E_2 的影响 |
| 2.2.4 对P_4 的影响 |
| 2.3 111mol Ghrelin 侧脑室注射对不同发情周期雌性大鼠LH、FSH 分泌的影响 |
| 2.3.1 对LH 的影响 |
| 2.3.2 对FSH 的影响 |
| 2.4 3 nmol Ghrelin 侧脑室注射对不同发情周期雌性大鼠E_2、P_4 分泌的影响 |
| 2.4.1 对E_2 的影响 |
| 2.4.2 对P_4 的影响 |
| 3 分析与讨论 |
| 3.1 Ghrelin 对促性腺激素分泌的影响 |
| 3.2 Ghrelin 大鼠性腺激素分泌的影响 |
| 4 小结 |
| 第五章 侧脑室注射 Ghrelin 对大鼠促性腺激素释放激素、促性腺激素mRNA、性腺激素受体mRNA 表达的影响 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.1.1 试验动物 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 溶液的配制 |
| 1.1.4 主要仪器设备 |
| 1.1.5 组织取材 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.2.1 总RNA 的提取 |
| 1.2.2 RNA 完整性检测 |
| 1.2.3 RNA 浓度和纯度测定 |
| 1.2.4 逆转录方法 |
| 1.2.5 引物设计 |
| 1.2.6 实时荧光定量PCR |
| 1.2.7 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 标准曲线与溶解曲线 |
| 2.2 侧脑室注射 Ghrelin (1nmol)对不同发情周期雌性大鼠GnRH mRNA 表达的影响 |
| 2.3 侧脑室注射Ghrelin（1nmol）对不同发情周期雌性大鼠LH、FSH mRNA 表达的影响 |
| 2.3.1 对LH mRNA 表达的影响 |
| 2.3.2 对FSH mRNA 表达的影响 |
| 2.4 不同剂量 Ghrelin 侧脑室注射对发情后期雌性大鼠 LH、FSH mRNA 表达的影响 |
| 2.4.1 对LH mRNA 表达的影响 |
| 2.4.2 对FSH mRNA 表达的影响 |
| 2.5 侧脑室注射Ghrelin 对不同发情周期大鼠ER_β、PR_(A+B) mRNA 表达的影响 |
| 2.5.1 对ER_βmRNA 表达的影响 |
| 2.5.2 对PR_(A+B) mRNA 表达的影响 |
| 2.6 不同剂量的 Ghrelin 侧脑室注射对发情后期大鼠对卵巢 ER_β、PR_(A+B) mRNA 表达的影响 |
| 2.6.1 对ER_βmRNA 表达的影响 |
| 2.6.2 对PR_(A+B)mRNA 表达的影响 |
| 2.7 侧脑室注射不同剂量的 Ghrelin 对雄性大鼠ARmRNA.表达的影响 |
| 2.8 侧脑室注射Ghrelin，大鼠垂体促性腺激素mRNA 表达丰度与血清促性腺激素浓度的相关性分析 |
| 3 分析与讨论 |
| 3.1 侧脑室注射 Ghrelin 对促性腺激素释放激素mRNA 表达的影响 |
| 3.2 侧脑室注射Ghrelin 对促性腺激素mRNA 表达的影响 |
| 3.3 侧脑室注射Ghrelin 对性腺激素受体mRNA 表达的影响 |
| 4 小结 |
| 第六章 Ghrelin 在体外对大鼠性腺激素分泌及其受体mRNA 表达的影响 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.1.1 试验动物 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 溶液的配制 |
| 1.1.4 主要仪器设备 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.2.1 性腺激素的测定 |
| 1.2.2 实时定量PCR 试验部分 |
| 1.2.3 细胞的制备与培养 |
| 1.2.4 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 不同浓度的Ghrelin 对孕酮、雌激素分泌的影响 |
| 2.1.1 对P_4 的影响 |
| 2.1.2 对E_2 的影响 |
| 2.2 不同浓度的Ghrelin 对睾丸间质细胞睾酮分泌的影响 |
| 2.3 不同浓度的Ghrelin 对PR_(A+B) mRNA、ER_βmRNA 表达的影响 |
| 2.3.1 对PR_(A+B) mRNA 的影响 |
| 2.3.2 对ER_βmRNA 的影响 |
| 2.4 不同浓度的Ghrelin 对睾丸间质细胞AR mRNA 表达的影响 |
| 3 分析与讨论 |
| 3.1 体外条件下Ghrelin 对E_2、P_4、T 分泌的影响 |
| 3.2 体外条件下Ghrelin 对ER_βmRNA、PR_(A+B) mRNA、AR mRNA 表达的影响 |
| 4 小结 |
| 全文结论 |
| 本课题的创新点和对课题的进一步设想 |
| 1. 从分子角度进一步阐明 Ghrelin 及其受体在大鼠精母细胞、卵母细胞中的表达 规律, |
| 2. GHS-R_(1b) 以及其它亚型的主要生理功能 |
| 3. Ghrelin 对生殖轴的作用机理有待于进一步探索 |
| 4. Ghrelin 在家畜体内的分布和表达，从而为畜牧业生产提供理论指导 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 读期间发表论文 |
（5）苏姜猪初情期启动基因的发育性变化及差异显示研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 一、初情期启动相关基因的研究进展 |
| 1 初情期启动的概述 |
| 2 NPY的研究进展 |
| 2.1 NPY的发现 |
| 2.2 NPY结构及分布 |
| 2.3 NPY受体 |
| 2.4 NPY的生物学功能 |
| 3 瘦素的研究进展 |
| 3.1 leptin研究的历史 |
| 3.2 leptin的结构与功能 |
| 3.3 leptin与能量平衡 |
| 3.4 leptin与生殖激素 |
| 3.5 leptin与生殖发育 |
| 3.6 leptin与初情期启动 |
| 3.7 leptin受体的研究 |
| 4 GPR54的研究进展 |
| 4.1 GPR54的发现与分子结构 |
| 4.2 GPR54的分布 |
| 4.3 GPR54的信号转导途径 |
| 4.4 GPR54对动物生殖的影响 |
| 二、差异显示技术及其在动物繁殖新技术上的应用进展 |
| 1 DDRT-PCR的原理 |
| 2 DDRT-PCR的引物设计 |
| 2.1 锚定引物 |
| 2.2 随机引物 |
| 3 DDRT-PCR参数的优化 |
| 3.1 保证起始(模板)mRNA的质量与浓度 |
| 3.2 降低dNTP浓度 |
| 3.3 选择最适的反转录和PCR退火温度 |
| 4 DDRT-PCR假阳性的鉴定方法 |
| 5 应用非放射性同位素mRNA差异显示技术 |
| 6 DDRT-PCR的发展 |
| 7 DDRT-PCR的优点与局限性 |
| 8 DDRT-PCR技术在猪繁育方面的应用 |
| 8.1 在猪初情期启动方面的应用 |
| 8.2 在猪胚胎、个体发育研究中的应用 |
| 8.3 在猪繁殖方面的应用 |
| 三、研究目的与意义 |
| 第二章 猪NPY-Y1、GPR54、Ob-Rb基因的克隆与分析 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 质粒、菌株 |
| 1.1.3 主要试剂 |
| 1.1.4 主要仪器 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 实验前准备工作 |
| 1.2.2 样品的采集 |
| 1.2.3 RNA的提取与检测 |
| 1.2.4 RT-PCR |
| 1.2.5 PCR反应 |
| 1.2.6 克隆测序 |
| 1.2.7 序列分析 |
| 1.3 相关软件 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 总RNA的检测 |
| 2.2 NPY-Y1基因的克隆与分析 |
| 2.2.1 NPY-Y1基因的扩增 |
| 2.2.2 NPY-Y1基因测序 |
| 2.2.3 NPY-Y1基因序列分析 |
| 2.3 GPR54基因cDNA的克隆与序列分析 |
| 2.3.1 RT-PCR结果 |
| 2.3.2 GPR54基因测序 |
| 2.3.3 GPR54基因序列分析 |
| 2.4 Ob-Rb基因的克隆与分析 |
| 2.4.1 Ob-Rb基因的扩增 |
| 2.4.2 Ob-Rb基因测序 |
| 2.4.3 Ob-Rb基因序列分析 |
| 3 讨论 |
| 3.1 高保真Pfu的忠实性 |
| 3.2 初情期启动的相关激素、肽和神经递质 |
| 3.3 NPY-Y1基因 |
| 3.4 GPR54基因 |
| 3.5 Ob-Rb基因 |
| 第三章 猪初情期前后相关基因在下丘脑-垂体-卵巢轴内的表达定位 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 样品的采集 |
| 1.5 冰冻切片的制备 |
| 1.5.1 器皿处理 |
| 1.5.2 载玻片包被 |
| 1.5.3 切片 |
| 1.6 原位杂交(ISH) |
| 1.7 免疫组化 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 NPY-Y1在下丘脑、垂体、卵巢的分布定位 |
| 2.1.1 下丘脑内NPY-Y1 mRNA原位杂交定位 |
| 2.1.2 垂体内NPY-Y1 mRNA原位杂交定位 |
| 2.1.3 卵巢内NPY-Y1 mRNA原位杂交定位 |
| 2.2 GPR54在下丘脑、垂体、卵巢的分布定位 |
| 2.2.1 下丘脑内GPR54 mRNA原位杂交定位 |
| 2.2.2 垂体内GPR54 mRNA原位杂交定位 |
| 2.2.3 卵巢内GPR54 mRNA原位杂交定位 |
| 2.3 Ob-Rb在下丘脑、垂体、卵巢的分布定位 |
| 2.3.1 下丘脑内Ob-Rb的免疫组化定位 |
| 2.3.2 垂体内Ob-Rb的免疫组化定位 |
| 2.3.3 卵巢内Ob-Rb的免疫组化定位 |
| 3 讨论 |
| 3.1 下丘脑-垂体-卵巢轴调控 |
| 3.2 初情期前后NPY-Y1 mRNA在下丘脑-垂体-卵巢轴内的定位 |
| 3.3 初情期前后GPR54 mRNA在下丘脑-垂体-卵巢轴内的定位 |
| 3.4 初情期前后Ob-Rb在下丘脑-垂体-卵巢轴内的定位 |
| 第四章 猪NPY-Y1、GPR54、OB-Rb在下丘脑-垂体-卵巢内的发育性变化研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 质粒、菌株 |
| 1.1.3 主要试剂 |
| 1.1.4 主要仪器 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 样品的采集 |
| 1.2.2 RT-PCR应用的引物序列 |
| 1.2.3 RNA的提取与检测 |
| 1.2.4 cDNA的合成 |
| 1.2.5 实时荧光定量标准品的克隆 |
| 1.2.6 荧光定量标准曲线的制备 |
| 1.2.7 样品中β-actin、猪NPY-Y1、GPR54与Ob-Rb基因的检测 |
| 1.2.8 统计分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 RNA鉴定 |
| 2.2 基因扩增与克隆测序 |
| 2.3 QRT-PCR结果 |
| 2.4 下丘脑、垂体与卵巢内NPY-Y1 mRNA表达实时荧光定量检测 |
| 2.5 下丘脑、垂体与卵巢内GPR54 mRNA表达实时荧光定量检测 |
| 2.6 下丘脑、垂体与卵巢内Ob-Rb mRNA表达实时荧光定量检测 |
| 3 讨论 |
| 3.1 荧光定量PCR技术 |
| 3.2 动物初情期的启动 |
| 3.3 下丘脑-垂体-卵巢内NPY-Y1 mRNA的发育性变化 |
| 3.4 下丘脑-垂体-卵巢内GPR54 mRNA的发育性变化 |
| 3.5 下丘脑-垂体-卵巢内Ob-Rb mRNA的发育性变化 |
| 3.6 NPY-Y1、GPR54、Ob-Rb基因的表达的相关性 |
| 3.6.1 NPY与GnRH脉冲释放 |
| 3.6.2 leptin与GnRH脉冲释放 |
| 第五章 应用差异显示技术对猪初情期启动关键因子的研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要引物 |
| 1.4 组织总RNA的提取 |
| 1.5 反转录——cDNA第一链的获得 |
| 1.6 DDRT-PCR |
| 1.7 琼脂糖、聚丙烯酰胺凝胶电泳 |
| 1.7.1 1%琼脂糖凝胶电泳 |
| 1.7.2 10%聚丙烯酰胺凝胶电泳 |
| 1.7.3 凝胶的银染处理 |
| 1.8 差异片段的回收及二次PCR |
| 1.8.1 差异片段的回收—煮沸法 |
| 1.8.2 二次PCR |
| 1.8.3 二次PCR产物的克隆 |
| 1.9 Reverse Northern杂交法剔除猪下丘脑内ESTs的假阳性 |
| 1.10 半定量法检测ESTs在不同发育时期猪下丘脑内的表达 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 总RNA样品制备的结果 |
| 2.2 DDRT-PCR结果 |
| 2.3 差异片段回收及二次PCR |
| 2.4 Reverse Northern杂交剔除假阳性干扰 |
| 2.5 差异片段测序及比对 |
| 2.6 半定量RT-PCR检测差异条带的表达 |
| 3 讨论 |
| 3.1 反应所用引物的筛选 |
| 3.2 反应条件对试验结果的影响 |
| 3.3 不同差异条带回收的方法对获得差异表达ESTs的量的变化 |
| 3.4 采用改进后的差异显示技术对本实验结果的影响 |
| 3.5 采用半定量技术对本实验结果的影响 |
| 3.6 差异序列的生物信息学分析 |
| 3.6.1 MS01功能预测 |
| 3.6.1.1 TLR在中枢神经系统的表达 |
| 3.6.1.2 Toll介导的信号转导 |
| 3.6.2 MS02功能预测 |
| 3.6.3 MS03功能预测 |
| 3.6.4 MS04、MS05、MS06功能预测 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（7）大鼠肝细胞GnRH受体的表达及其影响的研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 文献回顾 |
| 第一部分 促性腺激素释放激素及其受体的相关研究 |
| 第二部分 肝脏在糖尿病发病中的地位 |
| 第三部分 促性腺激素释放激素类似物引起的高血糖 |
| 正文 |
| 实验一 大鼠肝脏促性腺激素释放激素受体的定位研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验二 高浓度葡萄糖培养液对大鼠肝细胞GnRH 受体表达的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 个人简历和研究成果 |
| 致谢 |
（8）促性腺激素释放激素及其受体在糖尿病大鼠肠道、胰腺中表达的研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 文献回顾 |
| 正文 |
| 实验一 糖尿病大鼠肠道、胰腺GnRH及其受体免疫组织化学定位研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验二糖尿病大鼠肠道、胰腺GnRH及其受体、胰高血糖素原、 GLP-1 受体mRNA表达的研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 个人简历和研究成果 |
| 致谢 |
（9）进食和去势对大鼠空肠、胰腺促性腺激素释放激素及其受体表达影响的研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 文献回顾 |
| 一、促性腺激素释放激素及其受体 |
| 二、GnRH类似物与糖代谢的关系 |
| 三、肠道与糖代谢的关系 |
| 三、去势对糖代谢的影响 |
| 正文 |
| 第一部分 手术去势和皮下注射GnRH类似物对大鼠空肠、胰腺GnRH及其受体免疫组织化学研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第二部分 灌服葡萄糖溶液对大鼠空肠、胰腺GnRH及其受体mRNA相对表达量的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第三部分 手术去势对大鼠空肠、胰腺GnRH及其受体mRNA表达的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第四部分 皮下注射GnRH类似物对大鼠胰腺、肠道GnRH及其受体mRNA表达的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 个人简历和研究成果 |
| 致谢 |
（10）大鼠胃和下颌下腺卵泡刺激素的研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言和文献回顾 |
| 实验研究 |
| 1 材料和方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 个人简历和研究成果 |
| 致谢 |
四、大鼠胰腺促性腺激素释放激素受体mRNA的原位杂交（论文参考文献）
- [1]CircAkap17b作为miR-7家族的分子海绵调控大鼠腺垂体FSH分泌机制研究[D]. 汪长江. 吉林大学, 2020(08)
- [2]山羊下颌腺和胰腺中GnRH及GnRHR在生后发育时期变化规律的研究[D]. 王曙明. 山东农业大学, 2014(12)
- [3]GnRH、GTH、GH及其受体在山羊垂体—卵巢轴中的发育性变化[D]. 黄丽波. 山东农业大学, 2013(05)
- [4]Ghrelin对大鼠下丘脑—垂体—性腺的影响及其机理研究[D]. 王琳. 安徽农业大学, 2010(05)
- [5]苏姜猪初情期启动基因的发育性变化及差异显示研究[D]. 周春宝. 扬州大学, 2009(05)
- [6]大鼠肝促性腺激素释放激素受体的定位研究[J]. 谢菲,姬秋和,黄威权,王艳霞. 解剖学报, 2008(03)
- [7]大鼠肝细胞GnRH受体的表达及其影响的研究[D]. 谢菲. 第四军医大学, 2008(04)
- [8]促性腺激素释放激素及其受体在糖尿病大鼠肠道、胰腺中表达的研究[D]. 陈榕. 第四军医大学, 2008(04)
- [9]进食和去势对大鼠空肠、胰腺促性腺激素释放激素及其受体表达影响的研究[D]. 曹宏伟. 第四军医大学, 2008(04)
- [10]大鼠胃和下颌下腺卵泡刺激素的研究[D]. 于辉. 第四军医大学, 2006(12)