一、米非司酮对人卵巢癌3AO细胞体外增殖和性激素受体ER、PR的影响（论文文献综述）
谢卓庭[1]（2021）在《基于WNT/NF-κB双信号通路探讨橘荔散结丸对子宫肌瘤细胞的作用机制》文中进行了进一步梳理目的:本研究深入挖掘橘荔散结丸的化学成分,以人子宫肌瘤细胞为载体,探讨WNT/β-catenin与NF-κB双信号通路在人子宫肌瘤细胞中的作用。在此基础上,研究橘荔散结丸对人子宫肌瘤细胞的药效作用,并探讨橘荔散结丸通过WNT/β-catenin与NF-κB双信号通路干预人子宫肌瘤细胞的分子机制及作用机理。方法:首先基于UHPLC-QE-MS技术对橘荔散结丸化学成分分析。培养人原代子宫肌瘤细胞并进行免疫组化鉴定。采用Wnt通路抑制剂KYA1797K和NF-κB通路抑制剂PDTC干预人子宫肌瘤细胞,通过Western blotting及RT-qPCR技术检测WNT/NF-κB双信号通路信号分子及下游靶基因的表达水平。采取CCK8、流式细胞术检测橘荔散结丸干预人子宫肌瘤细胞的细胞增殖抑制率、凋亡率和细胞周期。通过Western blotting及RT-qPCR技术检测橘荔散结丸干预人子宫肌瘤细胞后WNT/NF-κB双信号通路信号分子及下游靶基因的表达水平。结果:1.基于UHPLC-QE-MS技术,建立了橘荔散结丸化学成分总离子流图和指纹图谱。共分离出663个化合物,包含195个萜类,105个黄酮类,79个生物碱类,69个苯丙素类,43个酚类及其他类型等。2.KYA1797K干预子宫肌瘤细胞,与空白组对比,Wnt 5b、IKK α、p-IKB α、P65、TNF α、IL-6 蛋白表达升高（P<0.05）,p-GSK-3β、β-catenin、EGFR、MMP2蛋白表达降低（P<0.05）,GSK-3 β、IKB α蛋白无显着差异（P>0.05）;子宫肌瘤细胞β-catenin、EGFR、MMP2 mRNA 表达降低（P<0.05）,IKK α、IKBα、P65、TNF α、IL-6 mRNA 表达升高（P<0.05）,Wnt 5b、GSK-3 β mRNA 无显着差异（P>0.05）。3.PDTC干预子宫肌瘤细胞,与空白组对比,Wnt 5b、p-GSK-3 β、β-catenin、EGFR、MMP2蛋白表达升高（P<0.05）,IKK α、p-IKB α、P65、TNF α、IL-6 蛋白表达降低（P<0.05）,GSK-3 β、IKBα蛋白无显着差异（P>0.05）;子宫肌瘤细胞 β-catenin、EGFR、MMP2 mRNA 表达升高（P<0.05）,IKKα、IKB α、P65、TNF α、IL-6 mRNA 表达降低（P<0.05）,Wnt 5b、GSK-3 β mRNA 无显着差异（P>0.05）。4.子宫肌瘤细胞加药培养12H、24H、48H,橘荔散结丸各药物浓度组与0mg/mL组对比细胞增殖抑制率均有显着差异（P<0.05）。早期凋亡率和晚期凋亡率,橘荔散结丸高低浓度组、米非司酮组与空白组相比,均有显着差异（P<0.05）;且橘荔散结丸高浓度组和米非司酮组大于橘荔散结丸低浓度组（P<0.05）。G0/G1期和G2/M期细胞数,与空白组相比,橘荔散结丸高低浓度组、米非司酮组均有显着差异（P<0.05）;且橘荔散结丸高浓度组和米非司酮组大于橘荔散结丸低浓度组（P<0.05）;橘荔散结丸高浓度组与米非司酮组之间无显着差异（P>0.05）。5.橘荔散结丸高低浓度组、米非司酮组与空白组对比Wnt 5b、p-GSK-3 β、β-catenin、EGFR、MMP2蛋白表达降低（P<0.05）,GSK-3 β蛋白表达无显着差异（P>0.05）。橘荔散结丸高浓度组、米非司酮组与低浓度组对比Wnt 5b、p-GSK-3β、β-catenin、EGFR、MMP2 蛋白表达降低（P<0.05）,GSK-3 β 蛋白表达无显着差异（P>0.05）。橘荔散结丸高浓度组与米非司酮组对比Wnt 5b蛋白表达较低（P<0.05）,p-GSK-3 β、GSK-3β、β-catenin、EGFR、MMP2 蛋白表达无显着差异（P>0.05）。6.橘荔散结丸高浓度组、米非司酮组分别与空白组和低浓度组对比IKKα,p-IKB α,P65、TNF α蛋白表达升高（P<0.05）,IKB α蛋白表达无显着差异（P>0.05）。橘荔散结丸低浓度组与空白组对比IKK α,P65蛋白表达升高（P<0.05）,p-IKB α、IKB α蛋白表达无显着差异（P>0.05）。米非司酮组与橘荔散结丸高浓度组对比p-IKBα,P65蛋白表达升高（P<0.05）,IKK α、IKB α、TNFα蛋白表达无显着差异（P>0.05）。米非司酮组IL-6蛋白表达高于橘荔散结丸低浓度组（P<0.05）,橘荔散结丸高低浓度组间无显着差异（P>0.05）。7.与空白组对比,橘荔散结丸高低浓度组、米非司酮组Wnt 5b、GSK-3 β、β-catenin、EGFR、MMP2 mRNA表达降低（P<0.05）,IKK α、IKB α、P65、IL-6 mRNA表达升高（P<0.05）;TNF α mRNA在橘荔散结丸高浓度组、米非司酮组中表达升高（P<0.05）,橘荔散结丸低浓度组中无显着差异（P>0.05）。与低浓度组对比,橘荔散结丸高浓度组、米非司酮组Wnt 5b、GSK-3 β、β-catenin、EGFR、MMP2 mRNA 表达降低（P<0.05）,IKB α、P65、IL-6 mRNA 表达升高（P<0.05）,IKKαmRNA表达无显着差异（P>0.05）。米非司酮组TNFα mRNA表达高于橘荔散结丸低浓度组（P<0.05）,而橘荔散结丸高低浓度组间无显着差异（P>0.05）。橘荔散结丸高浓度组与米非司酮组相比各蛋白mRNA表达无统计学差异（P>0.05）。结论:1.UHPLC-QE-MS技术可以对橘荔散结丸化学成分进行快速高效鉴定,为橘荔散结丸的药效物质研究提供基础。橘荔散结丸化学成分众多,包含萜类、黄酮类、生物碱类、苯丙素类、酚类等。2.Wnt/β-catenin通路抑制剂KYA1797K和NF-κB通路抑制剂PDTC均可影响子宫肌瘤细胞Wnt/β-catenin信号通路和NF-κB信号通路分子及下游靶基因的表达水平,说明子宫肌瘤细胞中两条信号通路之间可能存在交联作用。3.橘荔散结丸可以显着抑制子宫肌瘤细胞增殖,提高早期凋亡率和晚期凋亡率,阻滞细胞周期,证实了橘荔散结丸对子宫肌瘤细胞的药效作用。4.橘荔散结丸影响子宫肌瘤细胞Wnt/β-catenin通路和NF-κB信号通路分子及下游靶基因的表达水平,说明橘荔散结丸通过Wnt/NF-κB双信号通路干预子宫肌瘤细胞增殖凋亡。
谢宝珍[2]（2020）在《刘雁峰教授治疗子宫内膜异位症的经验总结及临床疗效观察》文中研究指明目的1通过“人机结合,以人为主”的传承研究方法,阐述导师刘雁峰教授对子宫内膜异位症（endometriosis,EMT,简称内异症）的病机认识及立论依据,总结导师治疗子宫内膜异位症的组方思路、配伍规律及用药特点。2通过临床研究,围绕疼痛程度、中医证候积分、卵巢异位囊肿的大小、女性激素水平以及CA-125水平这5个主要方面,评价温肾暖肝散结方治疗子宫内膜异位症的临床疗效。方法1调取2010年01月至2019年09月就诊于刘雁峰教授门诊的内异症患者的病历资料,共480例患者,1172诊次。根据纳入及排除标准最后筛选出104例患者,共207诊次。运用“古今医案云平台（V2.2.1）”软件进行中药物频数及药物组合频数统计、中药属性分析、关联规则分析、聚类分析以及复杂网络分析,挖掘导师治疗内异症的核心用药、药物组合及药物属性,并将挖掘结果整理成文稿形式交由导师审阅。结合半结构化专家访谈的定性研究方法,邀请导师围绕对该病的病因病机认识、立法依据、组方思路、用药配伍及加减规律进行探讨。根据访谈的内容,补充完善挖掘的结果。2收集2018年12月至2019年12月就诊于刘雁峰教授门诊的内异症患者共42例,根据纳入及排除标准对患者进行筛选,共纳入24例。给予温肾暖肝散结方中药口服治疗12周,方药组成包括:乌药、吴茱萸、肉桂、小茴香、元胡、郁金、没药、片姜黄等。采用自身对照的观察方法,以0、4、8、12周为观察时间点,动态观察并记录患者的痛经视觉模拟评分、痛经症状量表及中医证候积分,并在治疗前后检测卵泡期女性激素6项、CA-125及月经干净后3-5天测量并计算异位囊肿最大横截面积,共6个项目。从缓解疼痛症状、改善中医证候、缩小病灶、调节激素水平以及降低CA-125共5个方面评价温肾暖肝散结法治疗子宫内膜异位症的临床疗效。结果1基于“人机结合”方法的刘雁峰教授治疗子宫内膜异位症的经验总结（1）数据挖掘本研究运用古今医案云平台,对207张处方进行药物统计,共得162味中药,使用总频次为3394次。通过中药频数统计分析及复杂网络分析得出导师治疗内异症的核心药物包括:乌药、肉桂、葫芦巴、小茴香、红藤、元胡、没药、姜黄、郁金、丹参、巴戟天、忍冬藤、吴茱萸等。通过药物组合频数统计及关联规则分析得出常用药物组合包括:“乌药-吴茱萸”、“小茴香-肉桂”、“元胡-郁金”、“没药-姜黄”、“丹参-鳖甲”、“红藤-忍冬藤”等。通过聚类分析得出温补肾阳、暖肝行气及活血散结三个治疗方向的药物类群。其中,温补肾阳类群中的药物组成包括:葫芦巴、元胡、肉桂、小茴香、乌药、没药、姜黄等;暖肝行气类群中的药物组成包括:巴戟天、郁金、吴茱萸等;活血散结类群中的药物组成包括丹参、鳖甲、茯苓。通过药物属性分析得出导师所用药物的药性以温、平为主,味多辛、甘,主入肾、肝、脾经;药物功效以活血止痛、行气止痛及温通经脉为主。（2）专家采访通过半结构化的专家访谈,刘雁峰教授阐述了子宫内膜异位症的病机为“肾阳虚损,寒滞肝脉,瘀结成症”,该病的关键病位在肾、肝。基于对病机的认识,导师提出温肾暖肝散结法作为内异症的治疗法则,以温肾暖肝为主,兼以活血散结,强调标本兼顾的治疗原则。导师的组方思路亦以该法为指导,方从法出,自拟“温肾暖肝散结方”,方药组成包括:乌药、吴茱萸、肉桂、小茴香、元胡、郁金、没药、姜黄、红藤、忍冬藤等。导师用药平和,一药多用,注重药物间同类相须、异类相使及相反相成的配伍特点。2温肾暖肝散结方治疗子宫内膜异位症的临床疗效（1）痛经视觉模拟评分（visual analogue scale,VAS）根据VAS疗效判定,治疗12周后,治愈4人,显效6人,有效5人,无效9人,总有效率为62.50%,治愈率为16.67%。VAS评分随服药周期的延长而逐渐降低,治疗4周、治疗8周、治疗12周的视觉模拟评分均较治疗前下降,差异有统计学意义（P=0.002,P<0.001,P<0.001）。（2）痛经症状量表（COX menstrual symptom scale,CMSS）治疗4周、治疗8周、治疗12周的痛经及其伴随症状的CMSS总体评分、症状发生频率及症状程度均较治疗前下降,差异有统计学意义（P<0.05）。进一步根据该量表的结构条目,将该量表分为消化道症状、情绪症状、躯体症状及头面部症状进行分析。①消化道相关症状随服药周期的延长,消化道相关症状的发作频率及程度均逐渐下降。其中,治疗8周及治疗12周的消化道相关症状的总体评分均较治疗前下降,差异有统计学意义（P=0.001,P<0.001）;治疗8周、治疗12周消化道相关症状的频率评分均较治疗前下降,差异有统计学意义（P=0.002,P=0.001）;治疗4周、治疗8周、治疗12周的消化道症状程度均较治疗前下降,差异有统计学意义（P=0.026,P=0.001,P<0.001）。②情绪相关症状随服药周期的延长,情绪相关症状的发作频率及程度均逐渐下降。其中,治疗8周、治疗12周的情绪症状总体评分均较治疗前下降,差异有统计学意义（P=0.007,P=0.001）;治疗8周、治疗12周的情绪症状频率评分均较治疗前下降,差异有统计学意义（P=0.021,P=0.004）;治疗4周、治疗8周、治疗12周的情绪症状程度均较治疗前下降,差异有统计学意义（P=0.036,P=0.003,P<0.001）。③躯体相关症状治疗4周、治疗8周、治疗12周的躯体相关症状总体评分、频率评分及程度评分均较治疗前下降,但差异无统计学意义（P>0.05）。④头面部相关症状治疗4周、治疗8周、治疗12周的头面部症状总体评分均较治疗前下降,差异有统计学意义（P=0.009,P=0.017,P=0.004）;治疗8周、治疗12周的头面部症状频率评分均较治疗前下降,差异有统计学意义（P=0.042,P=0.017）;治疗4周、治疗8周、治疗12周的头面部症状程度均较治疗前下降,差异有统计学意义（P=0.008,P=0.005,P=0.001）。（3）中医证候积分根据中医证候积分的疗效判定标准,治疗12周后,显效3人,显效率为12.50%,有效12人,有效率为50%,总有效率为62.50%。中医证候积分随服药周期的延长而逐渐下降,治疗4周、治疗8周、治疗12周患者的阳虚寒凝血瘀型中医证候评分均较治疗前下降,差异有统计学意义（P=0.001,P<0.001,P<0.001）。（4）卵巢异位囊肿最大横截面积治疗前后异位囊肿最大横截面积不具有统计学差异（t=0.180,P=0.859）。（5）女性激素6项治疗前后E2、P、PRL、FSH、LH及T水平不具有统计学差异（P>0.05）。（6）CA-125治疗前后血清CA-125不具有统计学差异（Z=-0.052,P=0.959）。结论1刘雁峰教授对内异症的病机、病位有独到的认识,运用温阳散寒法以治病之本,活血消症法以治病之标。导师谨守病机,辨证施治,制方严谨,方证相应,随证加减。临证时,导师讲究用药平和,顾护阴血,并注重一药多用,配伍巧妙。2“人机结合,以人为主”的方法在总结导师学术经验的研究中具有一定的优势。定性的专家访谈方法能较好地补充并完善定量的挖掘的数据资料,使研究结果更全面、确切地反映导师的学术观点。3温肾暖肝散结方能有效缓解内异症相关性痛经及其伴随症状,缩短症状的持续时间及发作频率,改善阳虚寒凝血瘀证候,疗效持久且稳定。另外,温肾暖肝散结方在控制病灶大小的同时,并未抑制患者的卵巢内分泌功能。
刘珊燕[3]（2020）在《米非司酮抑制上皮性卵巢癌细胞增殖及侵袭作用机理的初步研究》文中研究表明目的:本研究旨在探究米非司酮是否影响上皮性卵巢癌增殖侵袭迁移,其抑制增殖的机制是否通过影响细胞周期,并观察米非司酮的调控作用是否与药物浓度有相关性。构建卵巢癌皮下移植瘤小鼠模型,观察不同剂量米非司酮对卵巢癌移植瘤的抑制作用。实验方法:1、分别通过MTT实验、Transwell侵袭迁移实验检测不同浓度（25μmol/L,50μmol/L,75μmol/L,100μmol/L）米非司酮对上皮性卵巢癌ID8细胞增殖、侵袭及迁移的影响。2、通过流式细胞周期技术检测不同浓度米非司酮处理后,ID8细胞周期的变化。3、选用C57BL-6小鼠,构建卵巢癌ID8细胞小鼠皮下移植瘤模型,随机分成对照组（双蒸水口服饲养）和米非司酮低中高剂量组（米非司酮0.5mg/kg/d,10mg/kg/d,30mg/kg/d,灌胃给药）,洛铂组（5mg/kg,腹腔注射）,咖啡组。通过每天测量移植瘤体积,绘制瘤体生长曲线,检测米非司酮对卵巢癌移植瘤生长的作用。免疫组织化学方法检测小鼠移植瘤组织中Ki67、CD34的表达。结果:1、随着米非司酮的浓度增加,ID8细胞的增殖抑制率逐渐上升,发生迁移侵袭的细胞数目减少,提示米非司酮以浓度依赖方式抑制ID8细胞增殖、迁移以及侵袭。2、流式细胞周期检测显示,米非司酮实验组阻滞在G1期的细胞数目高于对照组,进入S期的细胞数目小于对照组。3、动物实验表明,高剂量米非司酮组小鼠卵巢癌移植瘤体积生长速度小于对照组,移植瘤组织中Ki67、CD34表达低于对照组。结论:米非司酮可能通过影响细胞周期和血管生成,从而抑制上皮性卵巢癌ID8细胞的增殖、侵袭及迁移。
周朋洋[4]（2015）在《类固醇激素对犬子宫内膜基质细胞中PR和ERβ表达量的影响》文中进行了进一步梳理犬子宫蓄积类疾病多由子宫内膜功能异常引起，而子宫内膜的调控又与性激素受体数量密切相关。目前，不同类固醇激素对犬子宫内膜的作用机理尚不清楚，因此，本研究探索了在体外培养的犬子宫内膜基质细胞（ESCs）中，类固醇激素对PR（孕酮受体）和ERβ（雌激素受体β）的表达调控作用。通过分离子宫蓄脓犬与正常犬ESCs，观察其生长特性并对其进行细胞免疫荧光鉴定，分析比较该细胞在病犬中是否异常。结果显示，轻度子宫蓄脓犬和正常犬ESCs形态和特性基本一致，前者的细胞活性更强，增殖速度较快，可在接种后4天融合成片。经细胞免疫荧光鉴定，该细胞表达波形蛋白，阳性率达98%以上，由此表明本试验所分离的细胞为犬子宫内膜基质细胞。在试验中，将72孔子宫内膜基质细胞随机分成8组，每组9孔，每组细胞都用不同的类固醇激素（17β雌二醇、孕酮、米非司酮）进行处理。在含激素培养基中维持培养48h后，通过qPCR法和免疫荧光法对细胞中的PR和ERβ进行检测，得到的结果基本一致。结果显示，雌二醇能上调子宫内膜基质细胞中PR和ERβ的表达，孕酮能下调PR和ERβ的表达，雌二醇和孕酮联用时则使PR和ERβ的表达量达到最高。米非司酮能增加PR的表达，减少ERβ的表达，其同雌二醇、孕酮联合应用时，能维持PR和ERβ基本处于正常水平。本研究建立了犬子宫内膜基质细胞的体外细胞模型，并检测了类固醇激素对该细胞中PR和ERβ表达量的影响。该成果不但可以减少相关研究中的活体实验，还为阐明犬子宫蓄积类疾病的发病机制提供了一定的理论基础。
王超,谭文华[5]（2012）在《米非司酮在耐药性卵巢癌治疗中的研究进展》文中提出米非司酮（代号RU486）是一种作用于受体水平的孕激素拮抗剂,兼有抗糖皮质激素的作用,临床上主要用于终止早孕、紧急避孕和引产等。利用其抗孕激素活性治疗子宫肌瘤、子宫内膜异位症、异位妊娠等也获得成功。研究发现,米非司酮可抑制卵巢癌上皮细胞的生长,对于耐药性卵巢癌具有一定的疗效。现对米非司酮治疗耐药性卵巢癌的作用机制、体内体外的研究进展予以综述。
张翔[6]（2011）在《甲羟孕酮对人卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP的耐药逆转作用的研究》文中提出目的应用甲羟孕酮（Medroxyprogesterone Acetate,MPA）体外逆转人卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP的耐顺铂（cisplatin,DDP）效应,并对其可能的作用机制进行初步探讨。方法体外培养人卵巢癌浆液性囊腺癌细胞株SKOV3,及其耐顺铂细胞株SKOV3/DDP,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测不同浓度的顺铂对SKOV3、SKOV3/DDP的细胞毒作用,并计算耐药倍数。MTT法检测不同浓度的MPA对SKOV3/DDP的细胞毒性,确定MPA对此细胞株的非细胞毒性剂量,同法测定非细胞毒性剂量MPA联合DDP作用后SKOV3/DDP对顺铂耐药性的变化。采用流式细胞技术（FCM）检测细胞周期及凋亡情况。结果1 SKOV3/DDP细胞对DDP的耐药倍数为3.86倍2不同浓度梯度的MPA对SKOV3/DDP细胞有不同程度的抑制增殖作用,并呈剂量-效应关系。当MPA终浓度小于15.10μg/ml时,其对细胞生长无明显抑制作用。3 15μg/ml的MPA联合顺铂作用于SKOV3/DDP细胞,顺铂的IC50下降至57.72±0.48μg/ml,13.39±0.21μg/ml,7.93±0.18μg/ml逆转倍数分别为1.22,1.90,2.44。3 DDP与MPA联合作用于SKOV3/DDP细胞,使其细胞周期阻滞于G0/G1期,S期细胞比例下降。4 DDP与逆转剂量的MPA联合作用于细胞后,增加了耐药细胞的凋亡率。结论1 MPA具有抗SKOV3/DDP活性的作用,并呈浓度依赖性。2 MPA能够逆转SKOV3/DDP的耐药性,增强其对顺铂的敏感性。3 MPA使SKOV3/DDP细胞周期主要阻滞于G0/G1期,增加细胞的凋亡率。
况玉兰[7]（2009）在《米非司酮对人子宫内膜癌HEC-1-B细胞生物学行为及顺铂敏感性的影响》文中进行了进一步梳理目的:探讨米非司酮（mifepristone, MIF）对人子宫内膜癌HEC-1-B细胞增殖、凋亡及对顺铂敏感性的影响及作用机制。方法:体外培养人子宫内膜癌HEC-1-B细胞,单独或联合应用不同浓度的米非司酮、顺铂处理HEC-1-B细胞,采用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT法）测定米非司酮对HEC-1-B细胞增殖活性的作用;流式细胞术（FCM）分析细胞周期的变化;免疫组化方法检测HEC-1-B细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、增殖相关抗原Ki-67蛋白表达的变化。结果:（1）1.25mg/L和2.5mg/L的米非司酮对HEC-1-B细胞的增殖无明显影响,5mg/L～20mg/L米非司酮对人子宫内膜癌HEC-1-B细胞的生长有抑制作用（p<0.05或p<0.01）,随着米非司酮浓度的增加,抑制效果明显增加,且随着作用时间的延长,抑制率逐渐增强,呈现时间-剂量依赖性。1.25mg/L和2.5mg/L的米非司酮与1.0～4.0mg/L顺铂联合作用后,明显增强顺铂对HEC-1-B细胞的增殖抑制作用（p<0.05）,两者联合应用有协同作用,q>1.15。（2）流式细胞术结果显示:1.25 mg/L和2.5mg/L米非司酮作用于HEC-1-B细胞48小时后,细胞周期无明显改变（p﹥0.05）。5 mg/L～20 mg/L米非司酮作用于HEC-1-B细胞48小时后,使G0/G1期细胞比率明显上升,S期细胞比率明显下降（p<0.05或p<0.01）,并呈明显的浓度依赖性。1.25mg/L和2.5mg/L米非司酮和2.5mg/L顺铂联合作用组与单用顺铂组比较,HEC-1-B细胞G0/G1期比率明显增高、S期比率明显下降（均p<0.05）。联合用药中不同浓度MIF组之间G0/G1期和S期细胞比率无显着差异,p>0.05。（3）免疫组化方法结果显示:1.25 mg/L和2.5mg/L米非司酮作用于HEC-1-B细胞48小时后,Bcl-2和Ki-67蛋白表达水平与对照组比较,差异无显着性（p﹥0.05）。5 mg/L～20 mg/L米非司酮作用48小时后,Bcl-2及Ki-67蛋白的表达水平明显下降（p<0.05）,但无明显的浓度依赖性。1.25mg/L和2.5mg/L米非司酮和2.5mg/L顺铂联合作用组与单用顺铂组比较,细胞的Bcl-2和Ki-67蛋白的表达水平明显下降（p<0.05）。联合用药中,不同浓度米非司酮之间,无显着性差异,p>0.05。结论:米非司酮≥5mg/L时,具有抑制人子宫内膜癌HEC-1-B细胞生长和促进凋亡作用,能使细胞周期阻滞于G0/G1期。无细胞毒性浓度1.25mg/L和2.5mg/L米非司酮能增强顺铂对HEC-1-B细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用。其作用机制可能与阻滞细胞周期、调控凋亡相关基因的表达和促进细胞凋亡有关。
王建升[8]（2009）在《米非司酮对人早孕绒毛中妊娠相关因子的影响》文中提出目的:米非司酮是一种合成类固醇,其结构类似炔诺酮,是孕激素受体的拮抗剂。较早的研究认为,米非司酮使蜕膜发生变性、坏死,胚胎死亡而终止妊娠。随着研究的深入发现米非司酮可直接作用于绒毛滋养层细胞。近年研究表明,着床期的胚胎和子宫内膜除直接受到雌、孕激素的调节外,胚胎和子宫内膜自身还合成和分泌多种着床相关的蛋白因子,如血管内皮生长因子、白血病抑制因子、表皮生长因子、整合素、骨桥蛋白及基质金属蛋白酶等,它们以自分泌或旁分泌方式协调母胎的特殊生理状态。胚泡着床及妊娠成功的建立至少需要经过以下三个过程:（1）胚泡和细胞外基质的粘附;（2）着床部位细胞外基质的降解;（3）穿透细胞外基质。其中第一和第三个过程需要基质蛋白的细胞表面受体如整合素和骨桥蛋白等的参与,第二过程则需要能够降解细胞外基质的相应酶类,如基质金属蛋白酶等的参与。任何影响胚胎植入过程的因素,将导致植入的失败。米非司酮作为孕激素受体拮抗剂,不仅影响孕酮的生物学效应及多种蛋白因子,对妊娠及其产物的代谢和形态结构的影响也是多方面的,但是对于其调节机制尚不十分清楚。另外,目前国内外报道的米非司酮对早孕绒毛中骨桥蛋白及基质金属蛋白酶表达的研究结果也不完全一致。本研究采用免疫组织化学法和荧光定量PCR,研究米非司酮对早孕绒毛中孕激素受体、雌激素受体、骨桥蛋白、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达的影响,进一步探讨米非司酮抗早孕机制。材料和方法:将20名要求人工流产的正常妇女随机分为两组,其中10名妇女给予米非司酮150mg,服药后12～24h行负压吸宫术（研究组）,另外10名妇女直接行负压吸宫术（对照组）。负压吸宫术后,即刻收集绒毛组织。采用荧光实时定量聚合酶链反应方法检测两组绒毛组织中雌激素受体和孕激素受体的基因表达;采用免疫组织化学法检测两组早孕绒毛组织的骨桥蛋白、MMP-2和MMP-9的蛋白表达。结果:HE染色结果显示,对照组可见正常早孕绒毛组织形态学;研究组为部分绒毛间质水肿,绒毛组织呈小灶性变性、坏死,炎症细胞浸润;少数细胞核固缩、破碎、细胞质不均匀及空泡变性。免疫组织化学结果显示,骨桥蛋白、MMP-2和MMP-9的阳性表达产物为棕黄色颗粒,主要位于细胞膜和（或）细胞质内,也可见于细胞核上。对照组早孕绒毛组织中合体滋养层细胞、细胞滋养层细胞都显现骨桥蛋白、MMP-2和MMP-9的表达。在绒毛组织中相应部位,研究组骨桥蛋白、MMP-2和MMP-9的表达强度明显减弱。荧光实时定量聚合酶链反应结果表明,研究组绒毛孕激素受体mRNA的表达显着高于对照组（P＜0.01）;两组绒毛雌激素受体mRNA的表达差异无统计学意义（P＞0.05）。结论:1.正常早孕绒毛组织结构完整,米非司酮作用后结构发生改变,绒毛组织变性坏死。表明米非司酮可直接抑制绒毛滋养细胞增生,促进其变性、坏死,从而达到抗早孕的效果。2.服用米非司酮后,早孕绒毛中孕激素受体mRNA的表达量显着上调,而雌激素受体mRNA的表达量无显着变化。这一结果提示米非司酮通过与孕激素受体结合,竞争性拮抗孕激素活性,干扰了雌激素受体、孕激素受体之间的动态平衡,这可能是绒毛组织变性坏死的主要原因。3.研究组早孕绒毛骨桥蛋白的阳性表达显着低于对照组。这一结果提示米非司酮抑制了早孕绒毛中骨桥蛋白的合成,可能使滋养层细胞和蜕膜细胞的黏附、增殖和迁移能力下降,影响了胚泡着床和胎盘的形成,导致流产。4.研究组早孕绒毛MMP-9和MMP-2的阳性表达显着低于对照组。这一结果提示米非司酮抑制了早孕绒毛MMP-9和MMP-2的合成,使绒毛功能减退,难以维持妊娠,最终流产。
邢盈,王立英[9]（2008）在《米非司酮配伍顺铂对卵巢癌耐药细胞株CAOV3/DDP细胞凋亡和性激素受体的影响》文中进行了进一步梳理目的探讨米非司酮配伍顺铂对卵巢癌耐药细胞株CAOV3/DDP增敏作用以及凋亡率、雌激素受体（ER）和孕激素受体（PR）的影响。方法采用RPMI1640培养液对CAOV3/DDP细胞株进行培养,将CAOV3/DDP细胞株分5组:对照组（不加任何药物）、顺铂组（2μg/ml）、高剂量米非司酮加顺铂组（15μg/ml米非司酮和2μg/ml顺铂）、中剂量米非司酮加顺铂组（10μg/ml米非司酮和2μg/ml顺铂）、低剂量米非司酮加顺铂组（5μg/ml米非司酮和2μg/ml顺铂）。培养结束后采用MTT法观察不同浓度的米非司酮配伍顺铂对CAOV3/DDP细胞株增殖活力的影响;采用流式细胞术观察不同浓度的米非司酮配伍顺铂对CAOV3/DDP细胞株凋亡率、ER、PR的影响。结果与对照组比较,顺铂组对细胞增殖活力、细胞凋亡率以及ER、PR阳性率的影响,差异均无统计学意义（P>0.05）;与顺铂组比较,各剂量米非司酮加顺铂组对细胞增殖活力、生存率以及细胞凋亡率、PR阳性率的影响,差异均有统计学意义（P<0.05,P<0.01）,且随着米非司酮浓度的升高,对CAOV3/DDP细胞抑制作用逐渐增强,细胞凋亡率显着上升,PR阳性率下降（P<0.05,P<0.01）,各组ER阳性率无统计学意义（P>0.05）。结论米非司酮联合顺铂对CAOV3/DDP细胞增殖活力均具有显着抑制作用,且与米非司酮的浓度呈剂量依赖关系,米非司酮可提高顺铂化疗的敏感性,其增敏作用与抑制孕激素分泌,促进卵巢癌细胞凋亡有关。
吕东媛[10]（2008）在《Ghrelin在乌珠穆沁羊雌性生殖道内的表达及其真核表达载体的构建》文中提出Ghrelin是1999年发现的生长激素促分泌素受体（GHSR）的内源性配体,其最主要功能是通过与GHSR结合刺激生长激素的释放。最近发现生殖器官中有Ghrelin分布,提示其与生殖周期的调节和妊娠有重要关系。雌、孕激素对雌性生殖系统具有重要的调节作用,二者与Ghrelin表达之间是否有关尚无定论。目前未见有关于Ghrelin在乌珠穆沁羊生殖道内的研究报道。本文在获得乌珠穆沁羊Ghrelin （usGhl） cDNA全序列的基础上,对生殖道各组织Ghrelin mRNA进行定位;系统研究了Ghrelin基因在不同发情期和妊娠期的乌珠穆沁羊雌性生殖道各组织内的相对表达量及其与外周血中雌激素和孕酮之间的相互关系;利用体外培养的乌珠穆沁羊输卵管上皮细胞研究雌、孕激素对Ghrelin基因表达量的调节作用;建立usGhl真核表达体系,初步证实构建的重组质粒对动物生长有促进作用。本论文为反刍动物生产性能的提高奠定基础。1.根据GenBank报道的Ghrelin cDNA序列设计特异性引物,运用RT-PCR技术和RACE技术成功克隆了usGhl cDNA全序列。本研究扩增的usGhl cDNA序列全长634bp,包含由116个氨基酸编码的前原乌珠穆沁羊Ghrelin肽。使用Blast网页和DNAStar软件对得到的usGhl cDNA全序列进行分析,无论是cDNA序列还是预测的成熟肽序列都与其它哺乳动物具有较高同源性。本研究结果表明Ghrelin基因在不同动物间表现出较高保守性。2.将乌珠穆沁羊子宫体Ghrelin RT-PCR产物回收并进行地高辛探针标记,用于原位杂交技术检测Ghrelin mRNA在乌珠穆沁羊子宫体、输卵管、宫颈、阴道中的表达位置。结果为:Ghrelin mRNA在内（黏）膜层的上皮细胞和腺体中大量表达,在固有层和肌层少量表达;肌肉组织、结缔组织和外膜层不表达。说明在绵羊雌性生殖道各组织中,Ghrelin mRNA主要表达于内（黏）膜表层细胞。3.运用RT-PCR技术证实Ghrelin基因在乌珠穆沁羊子宫体、输卵管、子宫颈、阴道组织内均有表达且表达量不同:子宫体表达量最高,输卵管次之,子宫颈和阴道内的表达量最少。采用实时荧光定量PCR技术及激素电化学发光测定法研究了乌珠穆沁羊发情及妊娠期生殖道各组织Ghrelin基因表达量与体内雌、孕激素之间的关系。本研究中血清雌二醇和孕酮在发情及妊娠期的浓度变化符合家畜生理周期的一般规律。乌珠穆沁羊生殖道各组织Ghrelin基因的表达量随发情周期及是否妊娠发生规律性改变。其中子宫体、子宫颈和输卵管内Ghrelin基因的表达与雌二醇及孕酮浓度的变化基本呈正相关。阴道内Ghrelin基因的表达与雌二醇及孕酮浓度的变化没有相关性。4.将机械法、细胞沉降及密度梯度离心结合使用,成功获得了原代和传代培养的乌珠穆沁羊输卵管上皮细胞。传一代的输卵管上皮细胞分别添加不同浓度的17-β-雌二醇和孕酮,分别培养24h、48h、72h后用RQ-PCR方法检测Ghrelin基因表达情况。结果显示:17-β-雌二醇和孕酮对体外培养的绵羊输卵管上皮细胞具有促进贴壁和促生长作用;培养时间对Ghrelin基因表达无影响;一定浓度的17-β-雌二醇和孕酮对培养的输卵管上皮细胞内Ghrelin基因的表达有促进作用。5.培养的输卵管上皮细胞添加不同浓度他莫昔芬或米非司酮后再用17-β-雌二醇或孕酮刺激输卵管上皮细胞生长24h、48h、72h。使用RQ-PCR方法检测各组细胞Ghrelin基因表达情况。结果表明:他莫昔芬和米非司酮能够抑制培养的乌珠穆沁羊输卵管上皮细胞的生长;一定浓度他莫昔芬能降低17-β-雌二醇刺激的输卵管上皮细胞内Ghrelin基因的表达,一定浓度米非司酮能降低孕酮刺激的输卵管上皮细胞内Ghrelin基因的表达,且二者的抑制作用均呈现剂量依赖性;培养时间对输卵管上皮细胞内Ghrelin基因的表达量无影响。说明雌、孕激素能够促进培养的绵羊输卵管上皮细胞内Ghrelin基因的表达,雌、孕激素是通过与其受体相结合发挥作用。6.本论文成功构建了Ghrelin真核表达质粒（pcDNA-usGhl）,该质粒能在小鼠肌肉组织中特异性表达,并能维持约20天。按1μg质粒/g体重注射pcDNA-usGhl能促进小鼠生长。注射后第10～20天内,pcDNA-usGhl组体重均显着高于空质粒组（P<0.05）,PcDNA-usGhl组小鼠的料重比与空质粒组小鼠相比有增加的趋势,但差异不显着。实验中没有发现Ghrelin重组质粒DNA整合到宿主染色体上。观察心脏、肝脏、肾脏、脑及肌肉均没有发现异常肿大及病变现象。
二、米非司酮对人卵巢癌3AO细胞体外增殖和性激素受体ER、PR的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、米非司酮对人卵巢癌3AO细胞体外增殖和性激素受体ER、PR的影响（论文提纲范文）
（1）基于WNT/NF-κB双信号通路探讨橘荔散结丸对子宫肌瘤细胞的作用机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 子宫肌瘤的现代医学研究 |
| 1.1.1 定义 |
| 1.1.2 发病机制 |
| 1.1.3 治疗措施 |
| 1.2 Wnt/ NF-κB双信号通路与子宫肌瘤 |
| 1.2.1 Wnt信号通路与子宫肌瘤 |
| 1.2.2 NF-κB信号通路与子宫肌瘤 |
| 1.2.3 Wnt和NF-κB信号通路的交联作用 |
| 1.3 中医对子宫肌瘤的认识 |
| 1.3.1 中医对子宫肌瘤病因病机的认识 |
| 1.3.2 中医对子宫肌瘤的辨证施治 |
| 1.4 橘荔散结丸治疗子宫肌瘤的研究 |
| 第二章 实验研究 |
| 1. 实验一 基于UHPLC-QE-MS技术的橘荔散结丸化学成分分析 |
| 1.1 试药 |
| 1.2 实验试剂及仪器 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.4 结果 |
| 1.5 讨论 |
| 2. 实验二 人子宫肌瘤组织原代细胞培养及鉴定 |
| 2.1 病例来源 |
| 2.2 主要试剂、耗材及仪器 |
| 2.3 方法 |
| 2.4 结果 |
| 2.5 讨论 |
| 3. 实验三 Wnt/NF-κB双信号通路交联调控子宫肌瘤细胞的机制研究 |
| 3.1 实验细胞 |
| 3.2 实验试剂和仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.4 结果 |
| 3.5 讨论 |
| 4. 实验四 橘荔散结丸对子宫肌瘤细胞的药效作用研究 |
| 4.1 实验细胞 |
| 4.2 实验试剂和仪器 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.4 结果 |
| 4.5 讨论 |
| 5. 实验五 基于Wnt/NF-κB双信号通路探讨橘荔散结丸对子宫肌瘤细胞的作用机制 |
| 5.1 实验细胞 |
| 5.2 实验试剂和仪器 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.4 结果 |
| 5.5 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 致谢 |
| 统计学审核证明 |
| 详细摘要 |
（2）刘雁峰教授治疗子宫内膜异位症的经验总结及临床疗效观察（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述1 子宫内膜异位症的现代医学研究进展 |
| 1 发病机制 |
| 2 诊断 |
| 3 临床病理分型 |
| 4 临床分期 |
| 5 治疗策略与方法 |
| 6 小结 |
| 参考文献 |
| 综述2 子宫内膜异位症的中医研究进展 |
| 1 中医学对子宫内膜异位症的病因病机的认识 |
| 2 中医药治疗子宫内膜异位症的研究概况 |
| 3 小结 |
| 参考文献 |
| 引言 |
| 第二部分 基于“人机结合”的刘雁峰教授治疗阳虚寒凝血瘀型子宫内膜异位症的经验总结 |
| 1 研究目的及意义 |
| 2 研究内容 |
| 3 研究资料 |
| 3.1 数据来源 |
| 3.2 诊断标准 |
| 3.3 纳入标准 |
| 3.4 排除标准 |
| 4 研究方法 |
| 4.1 数据清洗与筛选 |
| 4.2 数据导入与核对 |
| 4.3 中药处方数据规范化处理 |
| 4.4 数据挖掘与分析 |
| 4.5 专家访谈 |
| 4.6 研究流程图 |
| 5 研究结果 |
| 5.1 数据录入情况 |
| 5.2 药物频次分析 |
| 5.3 药物组合频次分析 |
| 5.4 药物四气统计 |
| 5.5 药物五味统计 |
| 5.6 药物归经统计 |
| 5.7 药物功效统计 |
| 5.8 关联规则分析 |
| 5.9 聚类分析 |
| 5.10 复杂网络分析 |
| 5.11 专家访谈 |
| 6 讨论 |
| 6.1 导师治疗子宫内膜异位症的立论依据 |
| 6.2 温肾暖肝散结方的组方思路及配伍规律 |
| 6.3 用药特点 |
| 6.4 “人机结合”在学术经验传承研究中的应用价值 |
| 7 小结 |
| 第三部分 刘雁峰教授治疗阳虚寒凝血瘀型子宫内膜异位症的疗效观察 |
| 1 研究目的及意义 |
| 2 研究内容 |
| 3 研究资料 |
| 3.1 研究对象 |
| 3.2 诊断标准 |
| 3.3 纳入标准 |
| 3.4 排除标准 |
| 3.5 剔除标准 |
| 3.6 脱落标准及脱落病例处理 |
| 3.7 中止试验标准 |
| 4 研究方法 |
| 4.1 治疗药物 |
| 4.2 疗程及观察时间 |
| 4.3 合并用药记录 |
| 4.4 观察指标 |
| 4.5 疗效判定与评价标准 |
| 4.6 统计分析方法 |
| 5 研究结果 |
| 5.1 纳入病例情况 |
| 5.2 一般情况 |
| 5.3 治疗结果 |
| 5.4 不良反应记录情况 |
| 6 讨论 |
| 6.1 立法依据及方药分析 |
| 6.2 疗效分析 |
| 7 小结 |
| 结语 |
| 1 研究结论 |
| 2 研究创新 |
| 3 研究的不足与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 个人简历 |
（3）米非司酮抑制上皮性卵巢癌细胞增殖及侵袭作用机理的初步研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 主要英文缩略语索引 |
| 第1章 前言 |
| 第2章 实验材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 第3章 实验结果 |
| 第4章 讨论 |
| 第5章 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（4）类固醇激素对犬子宫内膜基质细胞中PR和ERβ表达量的影响（论文提纲范文）
| 目录 |
| Contents |
| 中英文缩略词汇表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 引言 |
| 1 犬子宫蓄积类疾病概况 |
| 1.1 犬子宫蓄积类疾病定义 |
| 1.2 发病特征 |
| 1.3 发病率 |
| 1.4 发病机理 |
| 1.5 临床症状和生理变化 |
| 1.6 诊断方法 |
| 1.7 手术疗法 |
| 1.8 保守疗法 |
| 2 犬子宫内膜中 PR 受体的调控 |
| 2.1 孕酮对 PR 受体的作用机制 |
| 2.2 犬发情周期中 PR 受体的表达 |
| 2.3 PR 受体同犬子宫蓄脓的关系 |
| 2.4 米非司酮对 PR 受体的作用机制 |
| 3 ERβ受体的研究进展 |
| 3.1 ERβ的发现 |
| 3.2 ERβ同乳腺癌的关系 |
| 3.3 ERβ同前列腺癌的关系 |
| 3.4 ERβ同结肠癌的关系 |
| 3.5 ERβ同卵巢癌的关系 |
| 3.6 ERβ的研究前景 |
| 4 子宫内膜基质细胞概况 |
| 4.1 子宫内膜基质细胞的内分泌功能 |
| 4.2 子宫内膜基质细胞的体外分离培养 |
| 4.3 子宫内膜基质细胞体外培养的应用 |
| 5 Image Pro Plus 在免疫组织化学中的应用 |
| 6 本研究的目的及意义 |
| 第二章 子宫蓄脓犬与正常犬子宫内膜基质细胞的分离比较 |
| 1 材料 |
| 1.1 子宫来源 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器和设备 |
| 1.4 实验试剂配置方法 |
| 2 方法 |
| 2.1 犬子宫的采集和处理 |
| 2.2 犬子宫内膜的消化 |
| 2.3 犬 ESCs 的分离培养 |
| 2.4 免疫荧光鉴定 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 不同发病程度的犬 ESCs 的分离效果 |
| 3.2 原代培养细胞的生长特性和形态特征 |
| 3.3 犬 ESCs 的免疫荧光鉴定结果 |
| 4 讨论 |
| 第三章 犬 ESCs 在含性腺激素培养基中的生长状况 |
| 1 材料 |
| 1.1 细胞来源 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器和设备 |
| 1.4 细胞培养基的配置 |
| 2 方法 |
| 2.1 原代犬 ESCs 的传代 |
| 2.2 犬 ESCs 的冻存与解冻 |
| 2.3 对犬 ESCs 的激素处理 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 传代培养的犬 ESCs 生长特性 |
| 3.2 冻存对犬 ESCs 的影响 |
| 3.3 犬 ESCs 在含性腺激素培养基中的生长状况 |
| 4 讨论 |
| 第四章 qPCR 法检测犬 ESCs 中 PR 和 ERβ的表达 |
| 1 材料 |
| 1.1 细胞来源 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器和设备 |
| 2 方法 |
| 2.1 犬 ESCs 的 RNA 抽提 |
| 2.2 RNA 反转录 |
| 2.3 引物设计 |
| 2.4 用相对标准曲线进行反应的评估 |
| 2.5 对所有样本中各基因的 CT值检测 |
| 2.6 结果的计算和统计 |
| 3 结果和分析 |
| 3.1 四种基因的反应扩增效率 |
| 3.2 所有样本中各基因的 CT值检测结果 |
| 3.3 PR 和 ERβ的相对表达量 |
| 4 讨论 |
| 第五章 免疫荧光法检测犬 ESCs 中 PR 和 ERβ的表达 |
| 1 材料 |
| 1.1 细胞来源 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器和设备 |
| 2 方法 |
| 2.1 犬 ESCs 的免疫荧光染色 |
| 2.2 荧光强度测量 |
| 2.3 统计分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 PR 和 ERβ在细胞中的分布 |
| 3.2 激素处理对 PR 和 ERβ表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的论文 |
（5）米非司酮在耐药性卵巢癌治疗中的研究进展（论文提纲范文）
| 1 米非司酮抗肿瘤作用的机制 |
| 1.1 调节细胞周期 |
| 1.2 调节细胞因子/受体 |
| 1.3 促进细胞凋亡 |
| 2 米非司酮逆转肿瘤细胞的耐药性作用机制 |
| 2.1 降低P糖蛋白多药耐药相关蛋白基因介导的细胞内药物外排作用 |
| 2.2 阻断神经酰胺合成葡萄糖基化神经酰胺 |
| 2.3 促进细胞凋亡 |
| 3 米非司酮对不同种类卵巢癌细胞株的作用 |
| 3.1 雌激素受体阳性、PR阳性的卵巢癌 |
| 3.1.1 人卵巢浆液性囊腺癌细胞株3AO |
| 3.1.2 人卵巢上皮浆液性癌细胞株CAOV3、顺铂耐药株CAOV3/DDP |
| 3.2 ER阳性、PR阴性卵巢癌 |
| 3.3 其他卵巢癌细胞系 |
| 3.4 卵巢癌腹水COC1细胞株、顺铂耐药株COC1/DDP |
| 4 米非司酮对耐药性卵巢癌的体内体外研究 |
| 5 结 语 |
（6）甲羟孕酮对人卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP的耐药逆转作用的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 综述 激素及相关受体在卵巢癌治疗领域的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（7）米非司酮对人子宫内膜癌HEC-1-B细胞生物学行为及顺铂敏感性的影响（论文提纲范文）
| 主要英文缩略词 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 综述 |
| 致谢 |
（8）米非司酮对人早孕绒毛中妊娠相关因子的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 缩略语 |
| 文献综述 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
（9）米非司酮配伍顺铂对卵巢癌耐药细胞株CAOV3/DDP细胞凋亡和性激素受体的影响（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 细胞培养 |
| 1.3 实验分组 |
| 1.4 MTT法细胞存活力测定 |
| 1.5 FCM检测 |
| 1.5.1 单细胞悬液制备: |
| 1.5.2 细胞DNA染色: |
| 1.5.3 ER、PR蛋白免疫荧光样品的制备: |
| 1.5.4 FCM检测条件与参数: |
| 1.6 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 不同浓度的米非司酮联合顺铂对CAOV3/DDP细胞增殖活力的影响 |
| 2.2 不同浓度的米非司酮联合顺铂对CAOV3/DDP细胞凋亡率、ER、PR阳性率的影响 |
| 3 讨论 |
（10）Ghrelin在乌珠穆沁羊雌性生殖道内的表达及其真核表达载体的构建（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 引言 |
| 1.1 Ghrelin 研究概述 |
| 1.2 Ghrelin 对生殖的作用 |
| 1.3 雌激素和孕激素及其二者拮抗剂 |
| 1.4 核酸疫苗 |
| 1.5 乌珠穆沁羊简介 |
| 1.6 本研究的目的及意义 |
| 1.7 本论文的实验路线设计 |
| 2 实验一 乌珠穆沁羊 Ghrelin (usGhl) cDNA 全序列的克隆及同源性分析 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 实验动物及其组织 |
| 2.1.2 主要仪器和试剂 |
| 2.1.3 引物的设计及合成 |
| 2.1.4 乌珠穆沁羊真胃组织总 RNA 的提取及检测 |
| 2.1.5 usGhl cDNA 中间序列的扩增 |
| 2.1.6 usGhl cDNA 中间序列的克隆及阳性质粒的筛选和鉴定 |
| 2.1.7 usGhl 3′末端cDNA 的克隆和序列分析 |
| 2.1.8 usGhl 5′末端cDNA 的克隆和序列分析 |
| 2.1.9 usGhl 全序列的同源性比较 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 乌珠穆沁羊真胃组织总 RNA 的检测 |
| 2.2.2 usGhl cDNA 全序列扩增结果 |
| 2.2.3 usGhl cDNA 的全序列及usGhl 同源性比较 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 关于usGhl cDNA序列 |
| 2.3.2 RACE 技术 |
| 2.3.3 usGhl 与其它哺乳动物的同源性 |
| 2.4 小结 |
| 3 实验二 乌珠穆沁羊生殖道 Ghrelin 的 RNA 原位杂交 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 实验动物及其组织 |
| 3.1.2 主要仪器和试剂 |
| 3.1.3 子宫体 Ghrelin 基因 RT-PCR 产物的合成、回收 |
| 3.1.4 子宫体 Ghrelin 基因核酸探针的地高辛标记 |
| 3.1.5 原位杂交 |
| 3.1.6 乌珠穆沁羊生殖道各组织 HE 染色 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 乌珠穆沁羊子宫体 Ghrelin RT-PCR 产物的回收 |
| 3.2.2 子宫体Ghrelin RT-PCR产物的地高辛标记 |
| 3.2.3 乌珠穆沁羊生殖道组织原位杂交检测结果 |
| 3.2.4 乌珠穆沁羊生殖道各组织 HE 染色结果 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 原位杂交技术 |
| 3.3.2 Ghrelin 的分布 |
| 3.3.3 Ghrelin 在乌珠穆沁羊雌性生殖道内的表达 |
| 3.4 小结 |
| 4 实验三 乌珠穆沁羊雌性生殖道的Ghrelin 基因与血清雌、孕激素关系的研究 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 实验动物及组织 |
| 4.1.2 主要仪器和试剂 |
| 4.1.3 荧光定量 PCR 引物的设计及合成 |
| 4.1.4 荧光定量实验方法 |
| 4.1.5 发情及妊娠期乌珠穆沁羊血清中雌二醇及孕酮浓度的测定 |
| 4.1.6 实验数据处理 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 总RNA检测 |
| 4.2.2 荧光定量 PCR 产物电泳检测结果及基因测序 |
| 4.2.3 usGhl和β-Actin荧光定量RT-PCR检测相关曲线状况 |
| 4.2.4 乌珠穆沁羊血清雌、孕激素浓度和生殖道usGhl 基因表达量的关系 |
| 4.3 讨论 |
| 4.3.1 关于实时荧光定量PCR |
| 4.3.2 关于本实验结果的讨论 |
| 4.4 小结 |
| 5 实验四 雌、孕激素对培养的输卵管上皮细胞 Ghrelin 基因表达的影响 |
| 5.1 乌珠穆沁羊输卵管上皮细胞的培养 |
| 5.1.1 实验材料 |
| 5.1.2 仪器设备 |
| 5.1.3 实验药品 |
| 5.1.4 输卵管上皮细胞的培养 |
| 5.1.5 培养细胞的染色体核型分析 |
| 5.1.6 免疫组化法鉴定上皮细胞 |
| 5.2 雌、孕激素对培养的乌珠穆沁羊输卵管上皮细胞Ghrelin 基因表达的影响 |
| 5.2.1 材料和试剂 |
| 5.2.2 RQ-PCR 引物的设计及合成 |
| 5.2.3 17-β-雌二醇对培养的输卵管上皮细胞 Ghrelin 基因表达的影响 |
| 5.2.4 孕酮对培养的输卵管上皮细胞 Ghrelin 基因表达的影响 |
| 5.2.5 细胞总 RNA 的提取及检测 |
| 5.2.6 RQ-PCR 检测培养的输卵管上皮细胞Ghrelin 基因表达量的方法 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 细胞培养结果 |
| 5.3.2 RQ-PCR 方法检测培养的输卵管上皮细胞Ghrelin 基因表达 |
| 5.3.3 添加17-β-雌二醇对培养的输卵管上皮细胞Ghrelin 基因表达的影响 |
| 5.3.4 添加孕酮对培养的输卵管上皮细胞 Ghrelin 基因表达的影响 |
| 5.4 讨论 |
| 5.4.1 输卵管上皮细胞的培养 |
| 5.4.2 实验中17-β-雌二醇、孕酮浓度的确定 |
| 5.4.3 17-β-雌二醇和孕酮对培养的输卵管上皮细胞的影响 |
| 5.4.4 17-β-雌二醇和孕酮对 Ghrelin 基因表达的影响 |
| 5.5 小结 |
| 6 实验五 他莫昔芬和米非司酮对培养的输卵管上皮细胞 Ghrelin 基因的影响 |
| 6.1 材料和方法 |
| 6.1.1 实验材料 |
| 6.1.2 试剂 |
| 6.1.3 RQ-PCR 引物的设计及合成 |
| 6.1.4 他莫昔芬和米非司酮对培养的输卵管上皮细胞 Ghrelin 基因的影响 |
| 6.1.5 细胞总 RNA 的提取及检测 |
| 6.1.6 添加拮抗剂后培养的输卵管上皮细胞 Ghrelin 基因表达的 RQ-PCR 检测方法 |
| 6.2 结果 |
| 6.2.1 他莫昔芬和米非司酮对培养的输卵管上皮细胞的影响 |
| 6.2.2 他莫昔芬浓度及培养时间对输卵管上皮细胞 Ghrelin 基因表达的影响 |
| 6.2.3 米非司酮浓度及培养时间对输卵管上皮细胞 Ghrelin 基因表达的影响 |
| 6.3 讨论 |
| 6.3.1 他莫昔芬和米非司酮对培养的输卵管上皮细胞生长的影响 |
| 6.3.2 关于雌、孕激素拮抗剂及其拮抗机制 |
| 6.3.3 添加他莫昔芬和米非司酮与 Ghrelin 基因表达的相关性 |
| 6.4 小结 |
| 7 实验六 usGhl 真核表达载体的构建及其促生长效果检测 |
| 7.1 实验材料及实验动物 |
| 7.1.1 实验动物 |
| 7.1.2 真核表达质粒及宿主细菌 |
| 7.1.3 主要试剂 |
| 7.1.4 主要仪器 |
| 7.2 实验方法 |
| 7.2.1 pcDNA-usGhl 重组质粒的构建 |
| 7.2.2 动物实验 |
| 7.3 结果 |
| 7.3.1 pcDNA-usGhl 重组质粒的构建 |
| 7.3.2 pcDNA-usGhl 重组质粒的大量提取 |
| 7.3.3 pcDNA-usGhl 重组质粒对免疫小鼠体重和采食量的影响 |
| 7.3.4 RT-PCR 半定量检测外源 Ghrelin 基因表达情况 |
| 7.3.5 pcDNA-usGhl 重组质粒与小鼠基因组的整合 |
| 7.3.6 小鼠各主要组织的形态学观察 |
| 7.4 讨论 |
| 7.4.1 Ghrelin 核酸疫苗的构建 |
| 7.4.2 免疫方案及其影响因素 |
| 7.4.3 Ghrelin 的促生长作用 |
| 7.5 小结 |
| 8 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 作者简介 |
四、米非司酮对人卵巢癌3AO细胞体外增殖和性激素受体ER、PR的影响（论文参考文献）
- [1]基于WNT/NF-κB双信号通路探讨橘荔散结丸对子宫肌瘤细胞的作用机制[D]. 谢卓庭. 广州中医药大学, 2021(02)
- [2]刘雁峰教授治疗子宫内膜异位症的经验总结及临床疗效观察[D]. 谢宝珍. 北京中医药大学, 2020(04)
- [3]米非司酮抑制上皮性卵巢癌细胞增殖及侵袭作用机理的初步研究[D]. 刘珊燕. 南华大学, 2020(01)
- [4]类固醇激素对犬子宫内膜基质细胞中PR和ERβ表达量的影响[D]. 周朋洋. 天津农学院, 2015(09)
- [5]米非司酮在耐药性卵巢癌治疗中的研究进展[J]. 王超,谭文华. 医学综述, 2012(24)
- [6]甲羟孕酮对人卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP的耐药逆转作用的研究[D]. 张翔. 河北联合大学, 2011(04)
- [7]米非司酮对人子宫内膜癌HEC-1-B细胞生物学行为及顺铂敏感性的影响[D]. 况玉兰. 广州医学院, 2009(07)
- [8]米非司酮对人早孕绒毛中妊娠相关因子的影响[D]. 王建升. 中国协和医科大学, 2009(S1)
- [9]米非司酮配伍顺铂对卵巢癌耐药细胞株CAOV3/DDP细胞凋亡和性激素受体的影响[J]. 邢盈,王立英. 河北医药, 2008(10)
- [10]Ghrelin在乌珠穆沁羊雌性生殖道内的表达及其真核表达载体的构建[D]. 吕东媛. 内蒙古农业大学, 2008(11)